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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2599| Variación del contenido de lípidos en la hemolinfa del camarón blanco Litopenaeus vannamei como respuesta al tratamiento con rCHH-B2 Variation of lipid content in the hemolymph of white shrimp Litopenaeus vannamei in response to treatment with rCHH-B2 | |
| ARIANA MONTIEL ARZATE | |
| ELIZABETH PONCE RIVAS | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| CHH, hormonas recombinantes, metabolismo lipídico, metabolismo glucémico, crustáceos, L. vannamei recombinant hormones, lipid metabolism, glycemic metabolism, crustacean | |
| Las hormonas hiperglucémicas de crustáceos (CHHs) son péptidos producidos en el complejo del órgano X - glándula del seno (OX-GS), uno de los centros neuroendocrinos más importantes en crustáceos. Estas hormonas actúan sobre diversos tejidos, principalmente hepatopáncreas y músculo, promoviendo la glucogenólisis e inhibiendo la gluconeogénesis. Son consideradas hormonas multifuncionales debido a que participan en diversas respuestas fisiológicas de gran importancia. La actividad hiperlipidémica de las CHHs observada en diferentes especies de cangrejos ha permitido sugerir que el metabolismo de lípidos está bajo control endocrino en crustáceos. No obstante, a pesar de la importancia de los lípidos como fuente energética para funciones metabólicas esenciales, a la fecha no se ha estudiado su regulación endocrina en otras especies de crustáceos, incluyendo el camarón blanco Litopenaeus vannamei, la especie comercial más cultivada y pescada en el mundo. A la fecha existen 4 variantes diferentes de CHH descritas para esta especie: CHH-A, CHH-B1, CHH-B2 y LvCHH_PO_ES. En los últimos años se han desarrollado herramientas biotecnológicas que han permitido la producción de hormonas recombinantes, lo que ha ampliado el conocimiento acerca de su funcionamiento y de los diferentes procesos en los que participan. En este trabajo se llevó a cabo la determinación del efecto de CHH recombinante sobre el nivel de lípidos y glucosa en la hemolinfa de camarones sub-adultos de L. vannamei. Los ensayos de expresión y purificación se llevaron a cabo utilizando como modelo a la hormona recombinante CHH-A (rCHH-A). Se utilizaron 2 plataformas de expresión diferentes: 1) E. coli BL21 Star/pET44a(+) y 2) expresando rCHH-A en la levadura Pichia pastoris en medio mínimo y rico. Aun cuando en E. coli la neurohormona fue producida como proteína de fusión (NusA-CHH-A), no fue posible eliminar los dominios adicionales en el N-terminal para obtener la hormona nativa. Debido a que no se logró purificar la cantidad necesaria de rCHH-A en el tiempo requerido, los bioensayos se realizaron con la hormona rCHH-B2 purificada previamente en el laboratorio utilizando camarones sub-adultos ablacionados bilateralmente aclimatados a condiciones hiper-osmóticas (35 ups) y a una temperatura de 26 °C. Los muestreos de hemolinfa fueron realizados a 0.5, 1, 3 y 6 h post-inyección de la hormona. Como control se utilizaron organismos no ablacionados sin inyectar, así como ablacionados bilateralmente... The hyperglycemic crustacean hormones (CHHs) are peptides produced in the complex of the X-organ - sinus gland (OX - GS), one of the most important neuroendocrine centers in crustaceans. These hormones act on various tissues, mainly hepatopancreas and muscle, promoting glycogenolysis and inhibiting gluconeogenesis. They are considered multifunctional hormones because they participate in several physiological responses of great importance. The hyperlipidemic activity of CHHs observed in different species of crabs has allowed to suggest that lipid metabolism is under endocrine control in crustaceans. However, despite the importance of lipids being an important source for essential metabolic functions, to date their endocrine regulation has not been studied in other crustacean species, including white shrimp Litopenaeus vannamei, the most cultured and caught commercial species in the world. Up to date four different variants of CHH has been described for this species: CHH-A, CHH-B1, CHH-B2 and LvCHH_PO_ES. In recent years, biotechnological tools have been developed that have allowed the production of recombinant hormones, which has expanded the knowledge about its operation and the different processes in which they participate. In this work the determination of the effect of recombinant CHH on the level of lipids and glucose of the hemolymph of sub-adult shrimp of L. vannamei was carried out. The expression and purification assays were performed using the recombinant hormone CHH-A (rCHH-A) as a model. Two different expression platforms were used: 1) E. coli BL21 Star / pET44a (+) and 2) expressing rCHH-A in the yeast Pichia pastoris in minimal and rich media. Although in E. coli the neurohormone was produced as a fusion protein (NusA-CHH-A), it was not possible to eliminate the additional domains at the N-terminus to obtain the native hormone. Because the required amount of rCHH-A could not be purified within the required time, the bioassays were performed with rCHH-B2 previously purified in the laboratory using sub-adult bilaterally ablated shrimp acclimated to hyper-osmotic conditions (35 psu) and a temperature of 26 °C. Samples of hemolymph were obtained at 0.5, 1, 3 and 6 h post-injection of the hormone. As control, no ablated organisms were used without injection, as well as bilaterally ablated organisms without injection and injected with PBS 1X. Bilaterally ablated shrimp injected with 2 µg/animal (232 pmol) of rCHH-B2 showed a significant... | |
| CICESE | |
| 2018 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Montiel Arzate, A. 2018. Variación del contenido de lípidos en la hemolinfa del camarón blanco Litopenaeus vannamei como respuesta al tratamiento con rCHH-B2. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 76 pp. | |
| OTRAS | |
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