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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/1141| Histología, histoquímica y actividad enzimática del sistema digestivo de Paralichthys californicus durante su ontogenia y evaluación de probióticos como promotores de la maduración del sistema Assesing the ontogeny of the digestive system in paralichthys californicus using histology, histochemistry and enzyme activity and evaluation of probiotics as promotors of its maturation | |
| Magali del Rosario Zacarías Soto | |
| JUAN PABLO LAZO CORVERA | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Enzimas digestivas,Paraluchthys californicus,Ontogenia,Ciencias del mar | |
| El cultivo de peces marinos es una práctica que se ha extendido en nuestro País en los últimos años. La producción y la supervivencia de larvas de alta calidad, representa uno de los principales problemas en la producción masiva de estos organismos, debido a que en la mayoría de los casos se desconoce tanto la anatomía de su sistema digestivo, como su fisiología digestiva, dificultando la formulación y el suministro de alimento adecuado a la capacidad digestiva de los organismos en cultivo. Las larvas de muchos peces marinos eclosionan con el sistema digestivo indiferenciado, incrementando su capacidad digestiva con el desarrollo de los órganos digestivos, así como por la secreción de las enzimas digestivas. En este trabajo se evaluó como primer objetivo, la capacidad digestiva de las larvas del lenguado de California (Paralichthys californicus) durante su ontogenia, utilizando análisis histológicos, histoquímicos y de actividad enzimática. Las larvas fueron cultivadas en estanques con un sistema de recirculación semi cerrado y alimentadas con rotíferos enriquecidos con ácidos grasos altamente insaturados (HUFA´S). La alimentación con los rotíferos inició el segundo día después de la eclosión (DDE) y hasta los 17 DDE; posteriormente, las larvas fueron alimentadas con nauplios de Artemia enriquecidos. Se cuantificó la actividad de la tripsina, leucina aminopeptidasa (LAP) y la actividad proteolítica total ácida y alcalina, durante la ontogenia, usando técnicas espectrofotométricas. Las larvas de P. californicus eclosionaron con la boca y el ano cerrados y su sistema digestivo consistió de un intestino recto, sin glándulas anexas. A partir de los 3 DDE, comenzaron a diferenciarse el hígado y el páncreas, y no fue sino hasta los 36 DDE que inició la diferenciación del estómago. La actividad específica de la tripsina y la LAP se detectó desde el primer DDE, con dos picos de máxima actividad. El primero a los 8 DDE y el segundo a los 20 DDE, este último coincidiendo con el cambio en el tipo de alimento. La actividad proteolítica alcalina no pudo ser cuantificada con la técnica utilizada, en tanto que la actividad proteolítica ácida total y específica solo pudieron detectarse una vez que el estómago terminó su diferenciación. El análisis histoquímico de la fosfatasa alcalina reveló que, previo a la metamorfosis, la parte posterior del intestino es la zona de mayor absorción de nutrientes, dada la alta actividad de esta enzima en esa región. Posteriormente, la zona de mayor absorción se ubicó en la parte anterior del intestino, proceso que coincide con el inicio de la formación del estómago. Previo a la metamorfosis, la actividad de la fosfatasa ácida se mantiene sin diferencias entre regiones; sin embargo, una vez que inicia el proceso metamórfico, la región anterior del intestino concentra la mayor actividad de esta enzima. Un segundo objetivo del trabajo consistió en suministrar probióticos a las larvas en cultivo, con el propósito de acelerar el proceso de maduración de su sistema digestivo. Los probióticos LEVUCELL® Y BACTOCELL® fueron suministrados en una concentración de 50 mg/L, utilizando como vehículos a los rotíferos y los nauplios de Artemia, enriquecidos con HUFA´S. El desarrollo morfológico del sistema digestivo de las larvas mantuvo el mismo patrón que el observado en la primera parte del trabajo, a excepción de que en este bioensayo, los primeros esbozos de las glándulas gástricas se observaron a los 26 DDE. A pesar de que durante los diferentes muestreos se observaron diferencias significativas, en la actividad de algunas de las enzimas, las actividades total y específica de la tripsina y la LAP mantuvieron el mismo patrón que el descrito en la primera parte del trabajo, sin observarse ningún efecto significativo producido por el suministro de los probióticos. La actividad total de la quimiotripsina, al igual que la actividad proteolítica ácida total, presentaron un incremento significativo a los 46 DDE, con el suministro de BACTOCELL, en comparación con los otros tratamientos experimentales. La fosfatasa alcalina presentó la misma distribución a lo largo del intestino, observada en la primera parte del trabajo, no encontrándose diferencias por efecto de los probióticos. Las larvas del lenguado de California poseen actividad proteolítica alcalina desde el momento de la eclosión y solo se detecta actividad proteolítica ácida, hasta la completa formación del estómago. Basándonos en la capacidad digestiva evaluada en este trabajo, se propone que el tiempo adecuado para realizar el destete en esta especie se encuentra entre los 36 y 40 DDE. Los probióticos suministrados no modificaron los patrones de desarrollo morfológico o de actividad enzimática de las larvas durante el período experimental. Sin embargo, el aumento en la actividad de algunas de las enzimas estudiadas se observó a los 46 DDE, por lo que se propone la evaluación de estos probióticos como estimuladores de la secreción de las enzimas digestivas, en etapas posteriores a la completa formación del estómago. The culture of marine fish is a new technology currently developing in our Country with a very promising future. The production of sufficient number of juveniles from eggs, to stock grow-out systems, represents one of the main problems curving the successful development of most commercial production systems. Increasing our knowledge of the ontogeny of the digestive system and larval digestive physiology will aid in formulating weaning microdiets to successfully replace live feed and increase survival during the larval period. Most marine fish larvae hatch with an undifferentiated digestive system, and increase their digestive capacity with the development of digestive organs concomitant with an increase production of digestive enzymes. The objectives of this study were first to asses the digestive capacity of the California halibut larvae (Paralichthys californicus) during ontogeny using histological, histochemical, and biochemical techniques and second to evaluate the use of probiotics as promoters of the maturation of the digestive system. Newly hatched larvae were reared in a semiclosed recirculating system with adequate replication and fed highly unsaturated fatty acid (HUFA)-enriched rotifers and Artemia. Feeding protocol consisted of rotifers from 2 days post hatch (DPH) until 18 DPH. Thereafter, larvae were fed HUFA-enriched Artemia nauplii. Total and specific of trypsin, leucine-aminopetidase (LAP) and alkaline and acid protease activities were assessed throughout development using spectrophotometric techniques. California halibut larvae hatched with closed mouth and anus, and the digestive system consisted of a simple straight intestine without any apparent associated glands. Differentiation of the liver and pancreas was first observed 3 DPH, while the formation of the gastric glands was first observed 36 DPH. Specific trypsin and LAP activities were detected 1 DPH, with two peaks of activity, 8 and 20 DPH. The former peak coincided with the change in the type of food from rotifers to Artemia. Significant acid proteolytic activity was measure around 36-40 DPH, indicative of a functional stomach. Based on histochemical analyses of alkaline phosphatase, it appears that prior to metamorphosis, the posterior intestine is the region with greater nutrient absorption. Thereafter, nutrient absorption is greater in the anterior intestine, coinciding with the beginning of the formation of the stomach. Before metamorphosis, no significant differences in acid phosphatase activity were detected between regions of the intestine. Although, once the metamorphosis process began, the anterior intestine concentrated the highest activity of this enzyme. For the second objective of this study, two probiotics LEVUCELL® and BACTOCELL® were supplied at a concentration of 50 mg/L, using HUFA-enriched-rotifers and Artemia nauplii as vehicles. In general, the morphological development of the digestive system was very similar to the first part of this study, except that gastric glands were first observed as early as 26 DPH. Similarly, digestive enzyme activities displayed the same trend as the previous trial without any significant effect from the probiotics, except for chymotripsin and acid proteases. Total chymotrypsin and acid proteolytic activity, were only significantly higher 46 DPH in larvae supplied with BACTOCELL. Lastly, no significant differences among treatments were observed in alkaline phosphatase activity and distribution throughout the intestinal regions assessed. Based on the results from this study, California halibut larvae seemed to have adequate alkaline proteolytic activity at first feeding and acid proteolityc activity was not detected until the complete formation of a functional stomach. Thus, considering the digestive capacity of the larvae evaluated in this study, it is recommended to perform weaning onto microdiets in California halibut around 36 to 40 DPH. The probiotics evaluated in this study did not significantly change the patterns of morphological development of the digestive system or the digestive enzyme activity. Nevertheless, the increase in activity of some digestive enzymes observed 46 DPH, suggest to potential used of these probiotics once metamorphosis is completed and warrants further evaluation. | |
| CICESE | |
| 2007 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| Zacarías Soto, M.R.2007.Histología, histoquímica y actividad enzimática del sistema digestivo de Paralichthys californicus durante su ontogenia y evaluación de probióticos como promotores de la maduración del sistema.Tesis de Doctorado en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.158 pp. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias |
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