Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem:
http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/1146| Localización de la quitina sintetasa 1 CHS-1 en hifas en crecimiento de Neurospora crassa Chitin synthase 1 “CHS-1” localization in Neuroposra crassa growing hyphae | |
| Eddy Francisco Sánchez León-Hing | |
| Meritxell Riquelme Perez | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Quintina sintetasa,Pared celular,Neurospora crassa,Ciencias del mar | |
| La quitina es el principal componente estructural de la pared celular de los hongos filamentosos, y está formada por un homopolímero de N-acetilglucosamina (GlcNAc) con enlaces β-1,4. La biosíntesis de este polímero se lleva a cabo por medio de la acción catalizadora de la enzima quitina sintetasa (CHS). Aunque se conoce la participación de las quitinas sintetasas en el proceso de formación de la pared celular, un proceso altamente polarizado, se desconocen las rutas de tráfico de dichas enzimas desde los puntos de síntesis hasta los lugares de crecimiento activo en la pared celular, es decir los ápices de las hifas. Actualmente se conocen para Neurospora crassa siete genes de quitina sintetasas: chs1, chs2, chs3, chs4, chs5, chs6 y chs7. En este trabajo se realizó una fusión para marcar la CHS-1 con la proteína verde fluorescente (GFP) y poder observar y analizar por medio de microscopía confocal de alta resolución el tráfico de vesículas en hifas en crecimiento de N. crassa. Se expresaron las fusiones a partir del promotor nativo o un promotor fuerte. Las fusiones correspondientes se utilizaron para transformar las cepas mutantes de N. crassa FGSC#9717 (delta mus-51::bar+; his-3) y N. crassa FGSC#9718 (delta mus-51::bar+) las cuales poseen una mutación que impide la integración ectópica de los casetes de inserción en el genoma de N. crassa durante la transformación. Las observaciones de las cepas transformantes seleccionadas mediante microscopía confocal de escaneo con láser permitieron el análisis de la localización y trayectoria de estas enzimas marcadas con GFP a niveles cercanos a los propios de las proteínas en cuestión. En el estudio se incluyeron ensayos con la sonda fluorescente (FM4-64) y el inhibidor de la ruta retículo endoplasmático-Golgi (Brefeldina A, BFA) con la finalidad de definir la localización y ruta de secreción de CHS-1-GFP. Chitin is the major structural constituent of the cell wall of filamentous fungi, and is composed of N-acetylglucosamine β-1,4-linked monomers. Chitin biosynthesis is accomplished through the catalyzing action of a group of enzymes named Chitin Synthases (CHS). Despite the accepted role of Chitin Synthases in cell wall assembly, a highly polarized process, it is not well understood how these enzymes are transported from their sites of synthesis en route to the highly active hyphal apex. At present about seven CHS genes have been reported in the filamentous fungus Neurospora crassa: chs1, chs2, chs3, chs4, chs5, chs6 and chs7. In this research we fused the green fluorescent protein (gfp) with a class III CHS gene, chs1, attempting to visualize and analyze vesicles containing CHS-1- GFP in Neurospora growing hyphae. The gene fusions were expressed under the control of the native chs1 promoter or a strong promoter (ccg1). N. crassa strains FGSC#9717 (delta mus-51::bar+; his-3) and N. crassa FGSC#9718 (delta mus-51::bar+) deficient in NHEJ (non-homologous end joining) were used as host strains for transformation given their high frequency of homologous recombination when exogenous DNA is introduced. Laser Scanning Confocal Microscopy (LSCM) observations of transformed selected strains allowed the analysis of the cellular localization and tracking the traffic of fluorescent particles labeled with GFP, at their native protein expression level. An endocytic fluorescent probe (FM4-64) and an inhibitor that interferes with ER-Golgi vesicle traffic (Brefeldin A, BFA) were utilized to investigate the secretory route of CHS-1-GFP. | |
| CICESE | |
| 2007 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Sánchez León-Hing, E.F.2007.Localización de la quitina sintetasa 1 CHS-1 en hifas en crecimiento de Neurospora crassa.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 99 pp. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias |
Cargar archivos:
| Fichero | Descripción | Tamaño | Formato | |
|---|---|---|---|---|
| 177541.pdf | Versión completa de la tesis | 2.13 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |