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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/1165| Localización y dinámica de los componentes del exocisto SEC-15 y SEC-5 en Neurospora crassa Lolalization and dynamics of the exocyst components sec-15 and sec-5 in Neurospora crassa | |
| Alejandro Beltrán Aguilar | |
| Meritxell Riquelme Pérez | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Anastomosis,Ciencias del mar,Secrección,Exocitosis | |
| El crecimiento polarizado requiere de una maquinaria excelsa y precisa de secreción. La secreción es definida como el proceso biológico por medio del cual es enviado al espacio extracelular material funcional orgánico o inorgánico. En eucariotas existen varias rutas de secreción, las clásicas y las no-clásicas. En las rutas secretoras no-clásicas las cadenas polipeptídicas evitan el paso por compartimentos celulares en su camino hacia la membrana plasmática. La ruta convencional o clásica consiste en el paso de las cadenas polipeptídicas recién sintetizadas o en síntesis por retículo endoplasmático (RE), después por vesículas secretoras a Golgi, red trans-Golgi y membrana plasmática. La exocitosis es el último paso de la secreción y en este paso las vesículas provenientes de la red transGolgi se encuentran fielmente con la membrana plasmática y se fusionan incrementando la superficie celular, integrando proteínas y lípidos, y expulsando el contenido al exterior de la célula. El exocisto es un complejo proteico octamérico (SEC-3, -5, -6, -8, -10, -15, EXO- 70 y -84), descrito por primera vez Saccharomyces cerevisiae y que ayuda a que las vesículas secretoras sean atadas a la membrana plasmática de manera específica, previo al ensamblaje de las SNAREs. En S. cerevisiae se ha observado que el componente SEC-15 interacciona con la GTPasa de vesículas secretoras SEC-4 y el componente SEC-5 junto con el componente EXO-84 compiten por la GTPasa RAL-1. En el hongo filamentoso Aspergillus nidulans se localizó la proteína SECC (SEC-3) en los ápices de las hifas en crecimiento. Los componentes SEC-3, SEC-5 y EXO-70 han sido localizados en el Spitzenkörper (SPK) y en la membrana plasmática de Ashbya gossypii dependiendo de su velocidad de crecimiento. En este trabajo se expresaron las quimeras SEC-15-GFP y SEC- 5-GFP en el hongo filamentoso Neurospora crassa y se analizaron células en crecimiento por microscopía confocal de barrido con Láser. Se encontró que los componentes SEC-15 y SEC-5 se concentran en la membrana apical de hifas en crecimiento y en el área externa del SPK. En hifas tratadas con BFA-Bodipy 558/568 fue posible observar a los 5 min. de exposición una colocalización de SEC-15-GFP y SEC-5-GFP con R.E., equivalentes de Golgi y la red trans-Golgi; una disminución de la fluorescencia en la membrana apical y la interrupción del crecimiento apical. En los sitios de anastomosis se observó una alta concentración de SEC-15-GFP y SEC-5-GFP, así como en los septos de más de 20 min. de formación. Polarized growth requires an excellent and precise secretory machinery. Secretion is defined as the biological process that involves the release of functional organic or inorganic material to the extracellular space. There are different secretory routes in eukaryotes, mostly called classical and non-classical. In non-classical routes newly synthesized polypeptidic chains avoid cell compartments such as endoplasmic reticulum (ER), Golgi (G) and trans-Golgi network (TGN) on their way to the plasma membrane (PM). Conventional or classical secretion routes comprehend the direction of newly synthesized or even polypeptidic chains in synthesis to ER, then in secretory vesicles to G, TGN and finally to the PM where they fuse increasing cell surface, integrating lipids and proteins, and expelling the intravesicular content to the cell exterior. The exocyst is an octameric protein complex (SEC-3, -5, -6, -8, -10, -15, EXO-70 and -84) first described in Saccharomyces cerevisiae that tethers secretory vesicles to the PM with high fidelity, previous to the SNAREs assembly. In S. cerevisiae it has been observed that Sec-15p interacts with the Sec-4p GTPase and that Sec-5p competes with Exo84p for Ral1 GTPase. In the filamentous fungus Aspergillus nidulans SECC (SEC-3) has been localized in the apices of growing hyphae. The localization of the SEC-3, SEC-5 and EXO-70 components at the Sptzenkörper (SPK) and at the apical PM of Ashbya gossypii has been correlated to the elongation rate. In this work the SEC-15-GFP and SEC-5-GFP chimeras have been expressed in the filamentous fungus Neurospora crassa and growing cells have been analized by Laser scanning confocal microscopy. The components SEC-15 and SEC-5 accumulate at the apical PM of growing hyphae and in the external area of the SPK. After 5 min of exposure to BFA-Bodipy 558/568 SEC-15-GFP and SEC-5-GFP colocalized with ER, G equivalents and the TGN. In addition we observed a reduction of the fluorescence signal in the apical PM and an interruption of apical growth. In sites of anastomosis and in septa with more than 20 min of synthesis, it has been observed a high concentration of SEC-15-GFP and SEC-5-GFP. | |
| CICESE | |
| 2009 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Beltrán Aguilar, A.2009.Localización y dinámica de los componentes del exocisto SEC-15 y SEC-5 en Neurospora crassa.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.105 pp | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias |
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