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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/1174| Obtención y caracterización de anticuerpos policlonales con capacidad de reconocimiento de la neurohormona Liv-CHH-SG1 en Litopenaeus vannamei Production and characterization of polyclonal antibodies with recognizing capacity of Litopenaeus vannamei Liv-CHH-SG1 neurohormone | |
| Jennifer Marián Mancera Flores | |
| Elizabeth Ponce Rivas ALEXEI FEDOROVISH LICEA NAVARRO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Ciencias del mar,Anticuerpos policlonales,Policlonal antibodies,Pichia pastoris,Litopenaeus vannamei | |
| En crustáceos, el complejo órgano X-glándula del seno ubicado en el pedúnculo ocular y es uno de los sistemas neuroendocrinos en los cuales se han identificado una variedad de neuropéptidos. La familia de hormonas neuropeptídicas CHH/MIH/GIH comprende a la hormona hiperglucémica de crustáceos (CHH), la hormona inhibidora de la muda (MIH) y la hormona inhibidora de las gónadas (GIH). Estos neuropéptidos regulan una amplia variedad de procesos fisiológicos incluyendo, muda, metabolismo de carbohidratos, reproducción y osmoregulación. La neurohormoma Liv-CHHSG1His ya ha sido clonada y expresada en Pichia pastoris y su actividad biológica determinada. Sin embargo, a la fecha no se han obtenido ni caracterizado anticuerpos policlonales con capacidad de reconocimiento de la neurohormona Liv- Liv-CHH-SG1. La expresión de la neurohormona recombinante Liv-CHH-SG1His se llevó a cabo a partir de una cepa Muts de P. pastoris utilizando medio BMMY con metanol al 4%. La proteína recombinante fue analizada en electroforesis Tricina-SDS-PAGE y corroborada por análisis de Western blot. La proteína fue cuantificada mediante el kit de análisis por BCA y RP-HPLC y utilizada para inmunizar un conejo. La sensibilidad y especificidad de los antisueros obtenidos fue analizada mediante ensayos de ELISA. Finalmente se establecieron las condiciones óptimas para el reconocimiento de la neurohormona recombinante y se realizaron los ensayos de reconocimiento en muestras de hemolinfa obtenidas de camarones sometidos a 28ºC y 35‰. La neurohormona recombinante Liv-CHH-SG1His expresada en P. pastoris tuvo un rendimiento de 71.43 µg ml<sup>-1</sup>. El suero hiperinmune obtenido a partir de la inmunización del conejo con la neurohormona recombinante presentó valor de titulación de 1:500. Los anticuerpos policlonales (IgG) precipitados a partir del antisuero fueron utilizados para detectar a la neurohormona Liv-CHH-SG1 nativa en muestras de hemolinfa tomadas a lo largo de un ciclo de muda de juveniles de L. vannamei. La técnica estandarizada tuvo un límite mínimo de detección de 1.62 pmol ml<sup>-1</sup> de neurohormona recombinante. In crustaceans, the X-organ-sinus gland complex in the eyestalk is one of the neuroendocrine systems in which a variety of neuropeptides have been identified. The CHH/MIH/GIH neuropeptide family comprise the crustacean hyperglycemic hormone (CHH), molt inhibiting hormone (MIH) and vitellogenesis /gonad inhibiting hormone (VIH/GIH). These neuropeptides can regulate a variety of physiological processes, including molting, carbohydrate metabolism, reproduction, and osmoregulation. The Liv-CHH-SG1His neurohormone has been cloned and expressed in Pichia pastoris and its biological activity determined. However, polyclonal antibodies with capacity of recognize Liv-CHH-SG1His neurohormone have not been produced or characterized. Recombinant Liv-CHH-SG1His was expressed in a P. pastoris Muts strain, using BMMY medium with 4% methanol. The recombinant protein was analyzed by Tricine-SDS-PAGE and confirmed by Western blot analysis. The protein concentration was determined by a BCA Protein Analysis kit and RP-HPLC and it was used for the rabbit immunization. The sensitivity and specificity of the antiserum were determined by ELISA analysis. Finally, the optimal conditions for the recognition of the recombinant neurohormone were established and the recognition assays with haemolymph samples obtained from shrimps exposed to 28ºC and 35‰ were realized. The recombinant Liv-CHH-SG1His neurohormone expressed in P. pastoris showed a yield of 71.43 µg ml<sup>-1</sup>. Rabbit antiserum raised against this recombinant neurohormone had a specific antibody titer of 1:500. Polyclonal antibodies (IgG) precipitated from antiserum, were utilized for detection of native Liv-CHH-SG1 in hemolymph samples during the molt cycle of L. vannamei juveniles. Standardized technique was sensitive to 1.62 pmol ml<sup>-1</sup> of recombinant neurohormone. | |
| CICESE | |
| 2009 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Mancera Flores, J.M.2009.Obtención y caracterización de anticuerpos policlonales con capacidad de reconocimiento de la neurohormona Liv-CHH-SG1 en Litopenaeus vannamei.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.106 pp. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias |
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