Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem:
http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/1439| Efecto de las hormonas hiperglucémicas de crustáceos recombinantes CHH-B1 y CHH-B2 de Litopenaeus vannamei en los niveles de glucosa, triglicéridos, proteínas y osmorregulación Effect of recombinant crustacean hyperglycemic hormones CHH-B1 and CHH-B2 of Litopenaeus vannamei on levels of glucose, triglycerides, proteins and osmoregulation | |
| LAURA CAMACHO JIMENEZ | |
| ELIZABETH PONCE RIVAS | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| CHH Camarón Proteína recombinante Neurohormona Metabolismo Osmorregulación Shrimp Recombinant protein Neurohormone Metabolism Osmoregulation | |
| Las hormonas hiperglucémicas de crustáceos (CHHs) son neurohormonas que regulan diversos procesos fisiológicos en crustáceos. Los péptidos CHH-B1 y CHH-B2 del camarón Litopenaeus vannamei son isoformas originadas por corte y empalme alternativo del gen chhB, las cuales difieren en secuencia sobretodo en el extremo Cterminal, donde CHH-B1 tiene un aminoácido libre (péptido CHH-L) y CHH-B2 tiene un grupo amida (péptido CHH). Para estudiar las funciones de estos péptidos en la modulación de algunas respuestas metabólicas y de osmorregulación en L. vannamei, CHH-B1 y CHH-B2 se expresaron de manera recombinante (rCHH-B1 y rCHH-B2) con una secuencia idéntica a los péptidos maduros nativos en la levadura Pichia pastoris. Ambas hormonas fueron purificadas por RP-HPLC e identificadas mediante secuenciación N-terminal e inmunodetección utilizando un anticuerpo con capacidad de reconocimiento dentro de la región conservada. El péptido rCHH-B2 además fue amidado in vitro para estudiar el efecto de la amidación sobre su actividad biológica. Para evaluar las propiedades, secuencias y estructuras de los péptidos se hicieron análisis predictivos con herramientas bioinformáticas y experimentales por espectroscopia. Los análisis de secuencias sugieren que ambas hormonas difieren en sus propiedades fisicoquímicas y que la región C-terminal es altamente variable no solo entre las isoformas de L. vannamei sino con respecto a otros péptidos CHH/CHH-L de otras especies, por lo cual podrían presentar diferencias funcionales entre sí y con las isoformas de otros crustáceos. La estructura secundaria de las rCHHs se analizó experimentalmente por espectroscopía FTIR, determinándose que rCHH-B2 tiene un mayor contenido de hélices alfa que rCHHB1 lo que coincidió con la predicción in silico de estructura secundaria y modelado tridimensional por homología. La actividad de ambas hormonas recombinantes sobre los niveles de glucosa, triglicéridos, proteínas y osmorregulación se evaluó in vivo. En experimentos con camarones ablacionados bilateralmente, ambas isoformas presentaron actividad hiperglucémica alta dependiente de la dosis de hormona. rCHH-B1 confirmó ser un péptido CHH-L con actividad hiperglucémica significativa contrario a lo observado en otras especies. Por otro lado, ambas isoformas fueron capaces de elevar la concentración de triglicéridos en la hemolinfa, observándose un efecto dosis-dependiente con rCHHB2. The crustacean hyperglycemic hormones (CHHs) are neurohormones that regulate diverse physiological processes in crustaceans. The CHH-B1 and CHH-B2 peptides of white shrimp Litopenaeus vannamei are isoforms originated by alternative splicing of chhB gene, which differ in sequence especially at C-terminal region, where CHH-B1 has a free amino acid (CHH-L peptide) and CHH-B2 an amide group (CHH peptide). To study the function of these peptides in modulation of some metabolic and osmoregulation responses in L. vannamei, CHH-B1 and CHH-B2 were recombinant expressed (rCHH-B1 and rCHH-B2) with a sequence identical to native mature hormones in the yeast Pichia pastoris. Both hormones were purified by RP-HPLC and identified by N-terminal sequencing and immunodetection by using an antibody with recognition capacity inside the conserved region. The peptide rCHH-B2 was also α-amidated in vitro to study the effect of amidation on its biological activity. To evaluate properties, sequences and structures of peptides, predictive analyses were performed with bioinformatics tools and by spectroscopy. Sequence analyses revealed that both hormones differ in their physicochemical properties and the C-terminus region is highly variable not only among the L. vannamei isoforms, but with respect to other CHH/CHH-L peptides of other species. This suggests that both peptides may differ each other in terms of structure and activity, and also with respect to CHH/CHH-L peptides from other species, which may result in functional differences between these peptides and with other crustacean isoforms. The secondary structure of rCHHs was experimentally analyzed by FTIR spectroscopy, which determined that rCHH-B2 has a higher contain of alpha helix than rCHH-B1 matching with in silico prediction of secondary structure and three-dimensional homology modelling. The activity of both recombinant hormones on levels of glucose, triglycerides, proteins and osmoregulation was evaluated in vivo. In experiments with bilaterally eyestalk ablated shrimp, both isoforms showed high dose-dependant hyperglycemic activity. rCHH-B1 confirmed to be a CHH-L peptide with significant hyperglycemic activity in contrast to experiments in other species. On the other hand, both isoforms were able to rise the triglyceride concentration in hemolymph, finding a dose-dependant effect with rCHH-B2. | |
| CICESE | |
| 2016 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| Camacho Jiménez, L.2016. Efecto de las hormonas hiperglucémicas de crustáceos recombinantes CHH-B1 y CHH-B2 de Litopenaeus vannamei en los niveles de glucosa, triglicéridos, proteínas y osmorregulación Tesis de doctorado en ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 134 pp. | |
| CIENCIAS DE LA VIDA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
Cargar archivos:
| Fichero | Descripción | Tamaño | Formato | |
|---|---|---|---|---|
| ebiblio_24460.pdf | Versión completa de la tesis | 2.64 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |