Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem:
http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2101| Análisis de la región de regulación del gene aprE de Bacilus subtilis mediante footprinting in-vivo FOOTPRINITNING in-vivo IN THE aprE REGULATORY REGION FROM Bacillus subtilis | |
| María Florencia Colombo Pallotta | |
| Jorge Olmos Soto | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Bacillus Subtilis,Genes,Footprinting in-vivo | |
| El gene aprE de Bacillus subtilis codifica para la subtilisina, la proteasa extracelular más abundante. Su expresión está controlada por una compleja red de proteínas, las cuales se unen al DNA en la región de regulación del gene para activar o reprimir su expresión Debido a la falta de información sobre los mecanismos de regulación de este gene en el presente trabajo se construyeron una serie de cepas con mutaciones que afectan a algunos de las proteínas reguladoras, con el fin de determinar su Actividad Específica y realizar la técnica de footprinting in-vivo para poder detectar cambios en la interacción DNA-proteína en la región de regulación del gene. Los datos de Actividad Específica de las cepas sinR-, hpr- y sinR/hpr- indican que las proteínas SinR y Hpr son represores de la expresión del gene. Esta conclusión se sustenta con los datos obtenidos en la cepa sinI-, la cual presentó una actividad del 25% con respecto a la w.t., mientras que la cepa que contenía al operón sinRI en alto número de copias presentó una represión casi total de la expresión del gene. Con respecto a los footprintings de las cepas sinI- y sinRF+++ en una región que no fue secuenciada pero que corresponde al sitio de unión de Hpr3, Hpr4, AbrB o SinR se observa protección de T0 a T2. Esta región en T3 se hipemetila lo que podría indicar que hay interacción entre las proteínas SinR y Hpr o que este es el sitio de unión in-vivo de SinR cercano al promotor. También es notoria la región de protección en el sitio de unión de Hpr2, lo que podría estar indicando la interacción de SinR con Hpr, al menos bajo estas condiciones. Asimismo, para el sitio de unión de Hpr1 se observa un patrón similar lo que le daría más fuerza a esta hipótesis. Bacillus subtilis aprE gene codes for the extraceIlular protease know as subtilisin. Its expression its regulated by a complex network of activators and repressors by binding the DNA in the aprE regulatory region. In order to understand the regulatory mechanisms, in this work, strains carrying mutations in some of the regulatory proteins were constructed. We measured Specific Activity and we performed footprinting in-vivo from this region. The Specific Activity indicated that SinR and Hpr are repressors of the gene expression. The sinI-1 strain had 25% of the normal activity and in the sinRI+++ strain the repression was total. As SinR was overproduced in sinI-1 and sinRI+++ strains, we can speculate that SinR is the most important repressor in this regulatory network. The footprinting in-vivo experiments showed that in the binding site of Hpr3, Hpr4, AbrB or SinR, there was a protection in T0 – T2, and in T3 this site presented a hipermetilation. We suggest two hypothesis to explain this behavior. The firts is that there is an interaction between SinR and Hpr. The other hypotesis is that this site was the proposed in-vivo to SinR near to the promoter. We found another protection sites in the Hpr2 and Hpr1 binding sites and this could be a good agreement with the first hypotesis. | |
| CICESE | |
| 2000 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Colombo Pallotta, M. F.2000.Análisis de la región de regulación del gene aprE de Bacilus subtilis mediante footprinting in-vivo.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.53 p. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias |
Cargar archivos:
| Fichero | Tamaño | Formato | |
|---|---|---|---|
| 133051.pdf | 11.91 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |