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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2210| Papel de la dineina citoplasmática en la organización del citoesqueleto microtubular de crassa ROLE OF THE DINEINA CITOPLASMATICA IN THE ORGANIZATION OF THE MICROTUBULAR CITOESQUELETO OF Neurospom crassa. | |
| Iván José Galván Mendoza | |
| Rosa Reyna Mouriño Pérez | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Neurospora crassa,Dineína citoplasmática | |
| El citoesqueleto microtubular en los hongos filamentosos aún no ha sido estudiado en su totalidad. Su nucleación. Polaridad y organización y organización in vivo ha generado diversas controversias en especial en cuanto a la función de las proteínas se refiere. La dineína se ha descrito como una proteína motora asociada al extremo terminal positivo de los microtúbulos (Mts) y en células animales se ha demostrado que participa en la polimerización, nucleación y organización del citoesqueleto microtubular. El objetivo de estas tesis es el de identificar el papel de la dineína en la organización de los MTS en neurospora crassa, comparando su dinámica en la cepas silvestres y en mutantes deficientes en dineína (rapy-1) y en dinactina (ropy-3), para ello se realizaron cruzas de cepa tipo silvestre con los Mts marcados (beta tibulina::GFP) CON MUTANTES ROPY-1 y ropy-3. Asimismo se marcó la cadena ligera intermedia de la dineína (DLIC) con la proteína verde fluorescente (GFP) con el fin de localizarla y observarla in vivo dentro de la célula. Se fusionó en gen de la GFP al de la DLIC y se trasformó N. crassa. Mediante microsopía el citoesqueleto microtubular observado de la mutante ropy-1 de N. crassa presentó Mts fragmentados, escasa densidad de Mts y la velocidad de elongación fue tres veces menor con respecto a la cepa silvestres, mientras que en la mutante ropy-3 se observaron Mts de mayor longitud, desorganizados y formando grupos. Las cepas silvestres presentaron una densa red microtubular al ápice. Los Mts se encontraron organizados en paralelo al eje de crecimiento, su organización y densidad fue menor en las zonas distales que en la punta, su crecimiento promedio fue de 0.056 µm s-1. La dineína fue observada asociada a los núcleos, su distribución sugiere una asistencia en el desplazamiento nuclear tanto en zonas cercanas a la punta como en zonas distales. En conclusión, la ausencia de dineína funcional en N. crassa ocasiona alteraciones en la distribución, organización, tamaño y movimiento de Mts en la región apical y suba pical que es el área crítica para el crecimiento celular de los hongos. The microtubular cytoskeleton has not been fully described yet. Some issues about microtubule (Mt) nucleation polarity and organization have been controversial. Dynein is a motor protein related to plus end of MTs, in animal cells has been shown that this protein participate in the polymerization, nucleation and organization of Mt. Nevertheless, it has been explore in fungi. The goal of this work is identify the rol of dynein in the organization of MTs in Neurospora crassa, comparing the dynamics of the microtubular cytoskeleton of wild type and mutants of dynein (ropy-1) and dynactin (ropy-3). On the other hand, dynein light intermediate chain (DCLI) was lable with green fluorescents protein (GFP) in order to localize in and descrive its vivo dynamics. Crosses of N. crassa wild type whose MTs were tagged whit GFP and ropy-1 and ropy-3 mutants were performed. DLIC gene was fuse to GFP gene and N. crassa was transform by electroporation. A confocal microscope LSM-Meta (Carl Zeiss) was used to capture images. In wild-type N. cassa, cytoplasmic Mts were mainly arranged longitudinally along the hyphal tube. Straight segments were rare; most Mts showed a distinct helical curvature with a long pitch and a tendency to intertwine with one another to form a loosely braided network throughout the cytoplasm. In the apical and subapical zones, there was a high density of MTs. In both ropy-1 and ropy-3 mutants, there was a marked decrease in the number of MTs along the distorted hyphal tubes. This decrease was especially evident in the apical region. In the ropy mutants, Mts were generally shorter that in the wild type and showed a greater tendency to from thick bundles. Overall, the microtubular cytoskeleton of the ropy mutants appeared scant and disorganized. In the 3D- images, the helical character of MTs was evident but pitch and orientation relative to the growing axis fluctuated widely giving rise to the obliquely or transversely oriented segments of MTs seen frequently on 2-D images of the ropy mutants. As hyphae elongated, the MTs moved forward in a helical pattern that was more readily apparent in the mutants because of the fewer number of MTs. In dynein or dynactin deficiencies of the ropy mutants cause a severe perturbation in MTs organization, as previously described, but also in microtubule polymerization and dynamics with serious negative consequences on organelle motion and distribution and hyphal growth rate. | |
| CICESE | |
| 2006 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Galván Mendoza, I. J.2006.Papel de la dineina citoplasmática en la organización del citoesqueleto microtubular de crassa.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 42 p. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias |
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