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Evaluación de bacterias aisladas de un cultivo de rotíferos (Brachionus plicatilis) como candidatas para su uso como probiótico en larvas de corvina blanca (Atractoscion nobilis)
Evaluation of bacteria strains from culture of rotifers (Brachionus plicatilis) as the candidates for use like probiotic in white seabass (Atractoscion nobilis) larvae.
Gerardo Sandoval Garibaldi
Benjamin Barón Sevilla
Roxana Rico Mora
Acceso Abierto
Atribución
Ciencias del mar,Atractoscion nobilis,Rotíferos,Corvina blanca,Larva,Probióticos
En los cultivos acuícolas, las bacterias afectan principalmente en etapas tempranas de desarrollo, causando alta mortalidad. En el caso de los peces marinos, la mayoría de las especies que se cultivan son alimentadas con rotíferos (Brachionus plicatilis o B. rotundiformis), que presentan una carga bacteriana alta, a la cual se le atribuyen eventos de mortalidad. Sin embargo, se ha observado la presencia de bacterias patógenas en los cultivos exitosos de rotíferos. Esto sugiere que entre la flora bacteriana presente en los cultivos existen bacterias que controlan a las bacterias patógenas y podrían ser usadas como probióticos en el cultivo de larvas de peces marinos. El objetivo de este trabajo fue evaluar si las bacterias viables cultivables presentes en un cultivo de rotíferos pueden ser utilizadas como probióticos en el cultivo de peces marinos, utilizando a las larvas de corvina blanca Atractoscion nobilis como organismos de prueba. Se evaluó la carga bacteriana del cultivo de rotíferos Brachionus plicatilis de la Unidad de Biotecnología en Piscicultura de la Facultad de Ciencias Marinas de la Universidad Autónoma de Baja California (UBP). Se tomaron muestras de rotíferos en todo el proceso del cultivo y se extrajeron las bacterias asociadas, se sembraron en medios Zobell, M65, TCBS y Pseudomonas. Las bacterias se aislaron y purificaron por medio de sembrados consecutivos. Para evaluar la patogenicidad de las cepas aisladas, las larvas de corvina se expusieron a un baño de bacterias a dos concentraciones (5x104 y 5x106 células ml-1), se realizaron 3 ensayos con 6 réplicas por tratamiento. Los huevos de corvina se obtuvieron del instituto Hubbs Seaworld research. También se evaluó la capacidad vibriostática de las cepas al enfrentarlas in vitro con una cepa de Vibrio alginolyticus ATTC 17749. La capacidad probiótica se evaluó in vivo exponiendo las larvas a un baño con las bacterias aisladas y a las 48 horas se adicionó un inóculo de V. alginolyticus. Los rotíferos presentaron mayor carga bacteriana después de ser enriquecidos, el lavado de los rotíferos fue eficiente aunque sólo eliminó las bacterias libres en el cultivo. En los ensayos de patogenicidad se encontró una supervivencia de las larvas de corvina mayor al 70% por lo que las cepas aisladas no fueron patógenas para la especie, a excepción de la cepa RotA2 que en un ensayo produjo una supervivencia del 28 %. V.alginolyticus tampoco fue patógena para las larvas de corvina al no mostrar diferencia significativa con el tratamiento control. Las larvas de corvina blanca mostraron la mayor supervivencia en presencia de las cepas RotA6 y RotA5 . En el ensayo gota a gota in vitro se observó que las cepas RotA5, RotA6 y RotA8 inhibieron a V. alginolyticus a los 5 días y a los 15 días de ser inoculadas. Mientras que, en el ensayo de difusión se observó que las cepas RotA5, RotA6 y RotA8 lograron crecer sobre la cepa de V. alginolyticus. Solo RotA8 inhibió el crecimiento de V. alginolyticus. Al evaluar la capacidad probiótica in vivo se observó que las cepas RotA6 y RotA5 produjeron la mayor supervivencia en las larvas de corvina blanca, sin embargo no se observaron diferencias significativas con las otras cepas y el control. Según los ensayos realizados las cepas RotA6, RotA4, RotA5 y RotA8 podrian considerase como probióticos potenciales para el cultivo de larvas de corvina. Sin embargo no se encontraron diferesncias significativas en la supervivencia de las larvas expuestas a las diferentes condiciones..
In aquaculture, bacteria affect mainly the early life stages of development, causing high mortality. In marine fish aquaculture, the majority of species are fed with rotifers (Brachionus plicatilis or B. rotundiformis), that in general have a high bacterial load that has been associated to significant mortality rates. Nevertheless, the presence of pathogenic bacteria has been reported in successful rotifer cultures. This suggests that along with the pathogenic bacteria the culture have other types of bacterial flora that provide a control over the pathogens and could be used as probiotics in the cultivation of marine fish larvae The objective of this work was to evaluate if the viable bacteria in a rotifer culture can be utilized as probiotics in the cultivation of marine fish larvae, utilizing white seabass (WSB) larvae (Atractoscion nobilis) as a test organism. Bacterial load was evaluated in the routine rotifer (B. plicatilis) culture maintained at the Unit of Biotechnology of Fish culture of the Faculty of Marine Sciences of the Autonomous University of Baja California (UBP). Samples were taken prior to feeding WSB larvae and were cultivated on Zobell, M65, TCBS and Pseudomonas bacteriological medias. The bacteria were isolated and purified through consecutive cultures. To evaluate the pathogenicity of the isolated bacteria, WSB larvae were exposed to two bacterial concentrations (5x104 and 5x106 cells ml-1), in 3 trials with 6 replicas each one. The WSB eggs were obtained of the Hubbs Seaworld Research Institute. The vibriostatic capacity of the isolated bacteria was evaluated in vitro, with Vibrio alginolyticus ATTC 17749. The probiotic capacity was evaluated in vivo exposing the larvae to isolated bacteria and at 48h were inoculated with of V. alginolyticus. The rinsing of the rotifer culture prior to feeding was efficient although it only eliminated free bacteria. Rotifers presented a greater bacterial load after enrichment. Seven bacteria strains were isolated, six Gram positive and one is a Gram negative. In pathogenesis trials survivorship of the WSB larvae was greater than 70% for which the bacteria strains are not considered pathogens for this species, except for the isolate RotA2 that produced a lower survival rate 28%. Also V. alginolyticus was not a pathogen for WSB larvae and significant differences were shown with the control. The larvae showed the highest survival in the presence of the strains RotA6 and RotA5, and no vibriostatic capacity was established for the isolated strains. Probiotic capacity was evaluated in vivo, were strains RotA6 and RotA5 produced greater survival of white seabass larvae, although statistical differences with other strains and the control were none clearly established. According to the trials strains RotA6, RotA4, RotA5 and RotA8 could be considered with probiotic potential for the sea bass larvae cultivation.
CICESE
2006
Tesis de maestría
Español
Sandoval Garibaldi, G.2006.Evaluación de bacterias aisladas de un cultivo de rotíferos (Brachionus plicatilis) como candidatas para su uso como probiótico en larvas de corvina blanca (Atractoscion nobilis).Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.58 p.
MICROBIOLOGÍA
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