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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2404| Utilización de biomarcadores moleculares para la evaluación de toxicidad por exposición a nonilfenol en peces zebra Danio rerio Use of molecular biomarkers for evaluation of toxicity to nonylphenol in ZEBRAFISH Danio rerio | |
| Isabel Guerrero Garduño | |
| Elizabeth Ponce Rivas | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Vitelogenina, Biomarcador, Nonilfenol, Disrupcién endocrina, RT-PCR, Dot blot, Vitellogenin, Biomarkers, Nonylphenol, Endocrine disruption, RT-PC blot | |
| EI nonilfenol (NP) es un intermediario metabdlico de la transformacién microbiana de los detergentes utilizados en todo el mundo, muestra cierta toxicidad aguda y es capaz de mimificar hormonas importantes resultando en la disrupcién de varios procesos por la interferencia de sefiales que controlan la fisiologia del organismo. Por otro lado, la vitelogenina (Vtg) es un biomarcador importante para el andlisis de la disrupcién endocrina, en particular estimulacién estrogénica, en vertebrados acuaticos. El pez zebra (Danio rerio) es un organismo que ha ganado importancia como nuevo modelo vertebrado en analisis genéticos y de biologia del desarrollo por mas de dos décadas. El efecto del NP ha sido evaluado en pez zebra. Sin embargo, estos trabajos se han llevado a cabo principalmente a nivel embrionario o larval. En este sentido, el objetivo de estatesis fue el evaluar la toxicidad por nonilfenol en una poblacién adulta de pez zebra expuestos a NP, mediante el uso de biomarcadores moleculares (ARNm de Vtg, dafio a ADN cromosomal y proteinas). La estrategia experimental incluyd: a) clonacién del gen de Vtg en ambos sentidos en la bacteria E. coli, b) transcripcién in vitro para la generacién de ARNm sintético sentido para una curva estandar de Vtg y ARNm sintético antisentido para la obtencién de una sonda marcada con biotina, c) la realizacién de los ensayos de retrotranscripcién-reaccién en cadena de la polimerasa (RT-PCR)y dot blot para evaluar la expresién del gen que codifica para la Vtg, d) evaluacién del dafio al ADN cromosomaly proteinas. El ARNm de Vtg mostré ser un buen biomarcador molecular para medir el efecto de xenoestrdgenos como el NP en adultos de pez zebra. Los ensayos de RT-PCRy dotblot mostraron un aumento en la expresién del gen de Vtg en los organismos alimentados con una dieta adicionada con NP a una concentracién de 171 pg g''. Estos resultados coinciden con el incremento observado en los niveles de la proteina Vtg reportado en un estudio paralelo realizado con organismos del mismo lote experimental. Asimismo se observé un efecto de degradacién de las muestras tanto a nivel de acidos nucleicos, como a nivel de proteinas, debido no solo a la exposicién a NP sino también al tiempo y forma de almacenamiento de las muestras. Por lo tanto, para futuros estudios con biomarcadores moleculares se sugiere el trabajo con muestras frescas de tejido de los organismos sometidos al xenoestrégeno. Nonylphenol (NP) is a metabolic intermediate from the microbial transformation of the worldwide used detergents. NP shows some acute toxicity, nevertheless is able to mimic important hormonesresulting in the disruption of several processes by interfering with the hormonal signals that control the overall organism physiology. On the other hand, vitellogenin (Vtg) is an important biomarkerfor the analysis of the endocrine disruption, in particular estrogen stimulation, in aquatic vertebrates. Zebrafish (Danio rerio) is an organism that has emerged as a new vertebrate model for genetic and developmental analysis for over two decades. The effect of the NP has been evaluated in zebrafish. Nevertheless, these works have been carried out mainly at embryonicorlarval level. In this sense, the objetive ofthis thesis was to evaluate the toxicity by NP in an adult population of zebrafish, using molecular biomarkers (Vtg mRNA, damage to chromosomal DNA and proteins). The experimental strategy included: a) cloning of the vitellogenin gene in both senses in thebacterium £. coli, b) transcription in vitro for the production of sense-strand mRNA for the development of a standard curve of vitellogenin and anti-sense mRNA to obtain the probe labeled with biotin, c) the development of the retrotranscription- polymerase chain reaction (RT-PCR) and dot blot analysis to evaluate the expression of Vtg gene d) evaluation of chromosomal DNA damage and proteins. The mRNA of Vtg showed to be a good molecular biomarker to measure the effect of xeno-estrogens like nonylphenolin adults of zebrafish. The RT-PCR and dot blot assays showed an increment of the Vtg mRNAexpression in the organisms fed with a diet added with 171 wg g-1 ofNP. These results are in agreement with the incrementin the levels of the Vtg protein observed in a parallel study using organisms of the same experimental lot. In addition, it was observed degradation of the chromosomal DNA and protein levels, not only for the exposition to NP but also to the time and form of storage of the samples. Therefore, for future studies with molecular biomarkersit is suggested to work with fresh tissue samples of the organisms exposed to the xeno-estrogen. | |
| CICESE | |
| 2007 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Guerrero Garduño, I.2007.Utilización de biomarcadores moleculares para la evaluación de toxicidad por exposición a nonilfenol en peces zebra Danio rerioTesis de Maestría en Ciencias.Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.101 pp. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias |
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