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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2461| Localización de las β(1-3)-endoglucanasas EGLC-1 y EGLC-2 y su papel en la morfogénesis de Neurospora crassa Localization of the β (1-3) endoglucanases EGLC-1 and EGLC-2 and their role in the morphogenesis of Neurospora crassa. | |
| Leonora Elizabeth Martínez Núñez | |
| Meritxell Riquelme Perez | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Endoglucanasas,Neurospora crassa,Ciencias del mar | |
| El modelo de crecimiento unitario de la pared celular propone que la extensión polarizada de las hifas en los hongos filamentosos es resultado de la síntesis y descarga de nuevos polímeros de la pared celular, la acción de enzimas hidrolíticos que proporcionan plasticidad a la pared y la fuerza de turgencia para promover la expansión de la célula. Existe poca información sobre las enzimas con capacidad de hidrolizar compuestos de la pared celular y que podrían contribuir a su plastificación. Las proteínas EGLC-1 y EGLC-2 son β (1-3) endoglucanasas putativas de Neurospora crassa, con un posible sitio de unión al grupo glucosil fosfatidilinositol (GPI) que permite su anclaje a la membrana plasmática. Por medio de PCR de fusión e integración en el plásmido pMF272 se construyeron dos vectores recombinantes que contienen el gen de la proteína verde fluorescente (gfp) insertado en la secuencia de eglc-1 justo después de la secuencia codificante para el péptido señal, y de eglc-2 justo antes del posible sitio de unión a GPI. Estos plásmidos se expresaron en la cepa de N. crassa FGSC #9717. Las cepas transformantes expresando EGLC-1-GFP o EGLC-2-GFP se analizaron mediante microscopía confocal de escaneo con láser para conocer su localización y dinámica. Estas endoglucanasas se encontraron en los eventos morfogenéticos importantes para el desarrollo del hongo. Ambas proteínas se localizan en el ápice de hifas y septos,. Los patrones de fluorescencia en cada uno de estos sitios fueron diferentes en cada caso, además de que EGLC-1-GFP también fue localizada en el septo de los conidióforos. Tambien se llevaron a cabo ensayos con inhibidores del citoesqueleto y del transporte de proteínas. Tanto el benomilo (inhibidor de los microtúbulos) como la brefeldina A (inhibidor de la vía secretora clásica) parecen no afectar la localización de EGLC-2-GFP, sólo la latrunculina A (inhibidor de cables de actina) tiene un efecto en la localización de EGLC-2-GFP. Los resultados obtenidos demuestran que enzimas con actividad lítica, tales como las endoglucanasas EGLC-1 y EGLC-2 de N. crassa, se encuentran en sitios claves de crecimiento, donde probablemente intervienen promoviendo la remodelación de la pared celular, tal como lo postula el modelo unitario de crecimiento de la pared celular. The unitary model of cell wall growth suggests that the polarized extension of hyphae in filamentous fungi is the result of the synthesis and deposition of new cell wall polymers, the action of hydrolytic enzymes that provide plasticity to the wall and turgor pressure to drive cell expansion. There is a little information on enzymes capable of hydrolyzing cell wall polymers that could serve to plasticize the cell wall. EGLC-1 and EGLC-2 are putative β (1-3) endoglucanases in Neurospora crassa, with potential binding sites for a glucosyl phosphatidylinositol group (GPI) which would allow them to anchor into the plasma membrane. Through fusion PCR and integration into the plasmid pMF272, two recombinant vectors were constructed containing the encoding sequence for green fluorescent protein (gfp). The gfp sequence was inserted within the eglc-1 sequence, just after the signal peptide encoding sequence. For the eglc-2 sequence, the insertion was just before the GPI-binding site. These plasmids were expressed in N. crassa strain FGSC # 9717 and prototrophic strains expressing EGLC-1-GFP or EGLC-2-GFP were analyzed by confocal laser scanning microscopy to monitor the location and dynamics of these proteins. These endoglucanases were found in morphogenetic events important to the development of the fungus. Both proteins were localized in the hyphal apical plasma membrane and in septa. The fluorescence patterns observed at each of these sites were different ifor each protein. Additionally, EGLC-1-GFP was localized at the septum of mature conidiophores. The effects of cytoskeleton inhibitors and secretory pathway transport on the dynamics of EGLC-2-GFP were analyzed. Neither benomyl (a microtubule inhibitor) nor brefeldin A (a secretory pathway inhibitor) affected strongly the localization of the proteins; only latrunculin A (an actin cables inhibitor) had a small effect in the localization of EGLC-2-GFP. The results reported here show that lytic activity of enzymes such as endoglucanases EGLC-1 and EGLC-2 in N. crassa, is present in critical areas of fungal morphogenesis, where they probably play a role in cell wall remodeling, as postulated by the unitary model of cell wall growth. | |
| CICESE | |
| 2011 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Martínez Núñez, L. E.2011.Localización de las β(1-3)-endoglucanasas EGLC-1 y EGLC-2 y su papel en la morfogénesis de Neurospora crassa.Tesis de maestría en ciencias.Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.75 pp. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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