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Establecimiento y caracterización de dos modelos para el estudio de la remodelación ósea
Establishment and characterization of two models for the study of bone remodeling
BRENDA IVETTE IDUARTE FRIAS
PATRICIA JUAREZ CAMACHO
Acceso Abierto
Atribución
Osteoclastos, osteoblastos, remodelación ósea, osteoporosis, enfermedades óseas
Osteoclasts, osteoblasts, bone remodeling, osteoporosis, bone diseases.
El sistema óseo cumple con una gran diversidad de funciones que contribuyen a la homeostasis del organismo, sin embargo, puede ser afectado por diversas patologías entre ellas la osteoporosis. La osteoporosis es una enfermedad que se caracteriza por una disminución de la densidad mineral ósea que compromete la fortaleza del hueso, aumenta el riesgo de fracturas, debilita físicamente y conduce a una disminución en la calidad de vida. Cada 3 segundos, ocurre una fractura osteoporótica en el mundo. Para comprender los mecanismos implicados en la remodelación ósea, mejorar las terapias actuales y estudiar nuevos agentes terapéuticos; es necesario desarrollar modelos que recreen el microambiente óseo. Por lo tanto, este trabajó tuvo como objetivo el establecimiento de diferentes modelos murinos para evaluar la remodelación ósea. Estos modelos incluyeron: 1. Un modelo in vitro de diferenciación a osteoclastos, o a osteoblastos empleando las líneas celulares RAW264.7 y MC3T3.E1 respectivamente. 2. Un modelo ex vivo para evaluar osteoclastogénesis a partir de médula ósea, y osteoblastogénesis partiendo de células aisladas de calvarias de ratón. 3. Un modelo murino para evaluar osteoporosis in vivo. La estandarización de los modelos in vitro mostró que las células RAW264.7 y MC3T3.E1 posiblemente perdieron su capacidad de diferenciación. Por otro lado, la utilización de médula ósea para osteoclastogénesis permitió obtener osteoclastos en 9 días utilizando medio complementado con factor estimulante de colonias de macrófagos (M-CSF) y RANKL. De la misma forma, la complementación con ácido ascórbico y β-glicerofosfato al medio de cultivo de las células aisladas de calvarias de ratón durante 21 días, permitió la obtención de osteoblastos. Finalmente, los ratones hembra a los que se les realizó ovariectomía para la evaluación de la osteoporosis in vivo, presentaron señales de osteoporosis como son la atrofia del útero y la disminución de hueso trabecular. Nuestros resultados muestran que los modelos establecidos son reproducibles y que pueden utilizarse para el estudio de mecanismos óseos o la evaluación de compuestos que modulen la regeneración ósea.
The human skeletal system fulfills a great diversity of functions that contribute to the body homeostasis, however, like any other component of the human body, can be affected by diverse pathologies, including osteoporosis. Osteoporosis is a bone disease, characterized by a decreased bone mineral density, that compromises bone strength, increases the risk of fractures and physical debilitation leading to a drastic decrease in quality of life. Worldwide, one osteoporotic fracture occurs every 3 seconds. To understand the mechanisms involved in bone remodeling, to improve the osteoporosis current treatments and to search for new therapeutic agents, it is necessary to develop research models that recreate the bone microenvironment. Therefore, this work aimed to establish different murine models to evaluate the bone remodeling. These models included: 1. An in vitro model of osteoblast or osteoclast differentiation using RAW264.7/MC3T3.E1 cells; 2. An ex vivo model to evaluate osteoclast or osteoblast differentiation from bone marrow or cells isolated from murine calvaria, respectively; 3. A murine model to evaluate osteoporosis in vivo. Our results in vitro showed that under our conditions, RAW264.7 and MC3T3.E1 cells did not differentiate into bone cells. Besides, we successfully induced osteoclast differentiation from bone marrow cells incubated for 9 days in medium supplemented with macrophage colony stimulating factor (M-CSF) and RANKL. While cells isolated from mouse calvaria cultured with ascorbic acid and β-glycerophosphate during 21 days produced osteoblast differentiation. Finally, the female mice that were ovariectomized to evaluate the osteoporosis in vivo, showed osteoporosis signals such as uterus atrophy and trabecular bone reduction. Our results showed that the established models are reproducible and they can be used to the study of bone remodeling mechanisms or for evaluation of compounds that modulate bone regeneration.
CICESE
2018
Tesis de maestría
Español
Iduarte Frias, B.I. 2018. Establecimiento y caracterización de dos modelos para el estudio de la remodelación ósea . Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 53 pp.
OSTEOPATOLOGÍA
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