Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem:
http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2528| Elaboración de un constructo para la sobreexpresión de proinsulina humana en Bacillus subtilis Elaboration of a construct for the sobreexpression of human proinsulin in Bacillus subtilis | |
| ABELARDO CAMPOS ESPINOZA | |
| JORGE OLMOS SOTO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Bacillus subtilis, Región reguladora aprE, hpr, degU, Proinsulina humana, aprE regulating region, Human proinsulin | |
| B. subtilis es uno de los microorganismos más utilizados para la expresión de numerosas proteínas heterólogas, debido a sus características, como la facilidad de manipulación genética, ser un organismo GRAS (Generally Regarded As Safe) y su capacidad de secretar grandes cantidades de proteínas al medio de cultivo. El sistema más utilizado en B. subtilis para la expresión heteróloga es el basado en la región reguladora del gen aprE. El gen aprE codifica para la proteasa alcalina subtilisina, la proteasa extracelular más abundante en B. subtilis y está relacionada con el inicio de la esporulación. Está fuertemente controlada por varias proteínas reguladoras, como DegU/DegS, AbrB, Hpr y SinR. Experimentos anteriores han demostrado que las mutaciones en los genes reguladores hpr y degU (denominadas hpr2 y degU32) inducen la sobreexpresión del gen aprE a niveles considerablemente altos. Recientemente se ha encontrado que sustituciones de nucleótidos puntuales en la región -35 del promotor de aprE pueden aumentar considerablemente la expresión y secreción de subtilisina y proteínas heterólogas bajo la regulación de aprE. En este trabajo se construyó una fusión del gen de proinsulina humana con la región promotora del gen de aprE de Bacillus subtilis, la cual se combinó con mutaciones en los genes reguladores hpr y degU, (hpr2 y degU32) y con sustituciones puntuales de nucleótidos en el promotor de aprE, tratando con esto de potenciar la expresión de proinsulina humana con la región reguladora de aprE a niveles más altos a los reportados hasta el momento. B. subtilis is one of the more used microorganisms for a variety of heterologous protein expression, due to its characteristics, like the facility of genetic manipulation, to be an organism GRAS (Generally Regarded As Safe) and its capacity to secrete great amounts of proteins to culture medium. The system more used in B. subtilis for the heterologous expression is based on the regulating region of the gene aprE. The gene aprE codifies for the subtilisin alkaline protease, the more abundant extracellular protease in B. subtilis and is related to the beginning of the esporulation. This is strongly controlled by several regulating proteins, like DegU/DegS, AbrB, Hpr and SinR. Previous experiments have demonstrated that the mutations in the regulating genes hpr and degU (denominated hpr2 and degU32) induce the sobreexpression of the gene aprE at considerably high levels. Recently, has been demonstrated that substitutions of precise nucleotides in region -35 of the promoter of aprE can increase considerably the expression of subtilisin and heterologous proteins secretion under the regulation of aprE. In this work was constructed a fusion of the human proinsulin gene with the promoter region of the gene aprE of Bacillus subtilis, which was combined with mutations in the regulating genes hpr and degU, (hpr2 and degU32) and with precise substitutions of nucleotides in the promoter of aprE, trying with this to boost the human proinsulin expression with the regulating region of aprE at higher levels to the reported until the moment. | |
| CICESE | |
| 2008 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Campos Espinoza, A.2008.Elaboración de un constructo para la sobreexpresión de proinsulina humana en Bacillus subtilis.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.63 pp. | |
| GENÉTICA HUMANA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias |
Cargar archivos:
| Fichero | Tamaño | Formato | |
|---|---|---|---|
| ebiblio17845.pdf | 39.33 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |