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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2540| Ensayos de obtención de fragmentos vNAR para la detección de Coccidioides spp. Assays to obtain vNAR fragments for Coccidioides spp detection | |
| JAMVIER BARUC LOPEZ TELLO | |
| MERITXELL RIQUELME PEREZ | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Coccidioides spp., biblioteca vNAR, coccidioidina, IDTP, ELISA vNAR library, coccidioidin | |
| La fiebre del Valle de San Joaquín o Coccidioidomicosis (CM) es una enfermedad pulmonar causada por el hongo Coccidioides spp. La perturbación del suelo por humanos, animales o condiciones climáticas ocasiona la dispersión de esporas de Coccidioides en el aire, pudiendo ser inhaladas por personas susceptibles. Las esporas alojadas en un huésped forman esférulas, que una vez maduras liberan endosporas capaces de diseminar la enfermedad a otros órganos por la formación de nuevas esférulas. Debido al riesgo que representa esta enfermedad diversos autores han estudiado la distribución del hongo, y evaluado su incidencia con base a variables climatológicas como las temporadas de lluvias seguidas de periodos secos, la temperatura y las tormentas de arena. Además, se han realizado muestreos de animales que actúan como reservorios del agente etiológico. También se han analizado muestras de suelo por medio de métodos microbiológicos y moleculares. Los métodos actuales tienen limitantes ya que son influenciados por la información disponible en bases de datos epidemiológicos y genéticos; requieren altas medidas de bioseguridad para evitar contagios accidentales; requieren un gran esfuerzo de muestreo debido a la distribución aleatoria del hongo y/o implican costos altos de reactivos y equipos especializados. En este trabajo se propuso obtener fragmentos recombinantes de anticuerpos de tiburón (vNAR) afines a Coccidioides spp., los cuales permitan el desarrollo de un método de detección reproducible y de bajo costo para aplicarlo en zonas de riesgo. Este método facilitaría la detección directa del hongo sin requerir aislamientos del hongo o extracciones de ADN. Para la selección de anticuerpos afines a Coccidioides spp. se utilizaron dos antígenos: IDTP (IMMY©) y coccidioidina (InDRE). Se realizó una bioselección de fragmentos vNAR a partir de una biblioteca no inmune de fagos recombinados. Para la bioselección se utilizaron los dos antígenos no patogénicos obtenidos a partir del hongo, y para comprobar su eficiencia se realizaron pruebas de expresión, reconocimiento y especificidad por los antígenos. A partir de estos análisis se encontró un fragmento vNAR capaz de reconocer al antígeno IDTP, el cual podría ser utilizado para el desarrollo de un método de inmunodetección. Valley Fever or Coccidioidomycosis (CM) is a pulmonary disease caused by the fungus Coccidioides spp. Soil disturbance by humans, animals or climate leads to Coccidioides spores dispersion in the air and spores inhalation by people. The spores form spherules inside a host that grow up creating endospores capable of disease dissemination and new spherules formation. Because of its prevalence, many authors had studied the fungus distribution as well as evaluated its incidence based on climatic conditions like rainy seasons follow by drought, temperature, and sandstorms. Animal sampling has been performed to assess reservoirs. Microbiological and molecular methods have been used to analyze soil samples. Current methods efficiency is affected by available epidemiological and genetic information, biosafety facilities needs, sampling effort, reagents costs, and specialized equipment needs. In this work, it was proposed to obtain recombinant fragments of shark antibodies (vNAR) capable of recognizing Coccidioides spp. This method would allow the development of a reproducible detection method of risk zones, at lower costs. This method would not require fungus isolation or DNA extraction. Antibody biopanning was performed using IDTP (IMMY©) and coccidioidin (InDRE) antigens as baits. vNAR fragment selection was made up using a synthetic library of nonimmune recombinant phages. Expression, recognition, and specificity analysis were done to evaluate its effectiveness as a detection method. We find a vNAR fragment capable of recognizing the IDTP antigen which would be useful for future immune-detection methods. | |
| CICESE | |
| 2018 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| López Tello, J.B. 2018. Ensayos de obtención de fragmentos vNAR para la detección de Coccidioides spp. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 44 pp- | |
| HONGOS | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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| Fichero | Descripción | Tamaño | Formato | |
|---|---|---|---|---|
| Tesis_López_Tello_Jamvier_Baruc_09_nov_2018.pdf | Versión completa de la tesis | 1.35 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |