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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2595| Identificación del homólogo a Cornichon/Erv14 y su papel en la regulación del crecimiento del hongo filamentoso Neurospora crassa Identification of the homolog of Cornichon/Erv14 and its role in the regulation of growth in the filamentous fungus Neurospora crassa | |
| LUIS ENRIQUE SASTRE VELASQUEZ | |
| MERITXELL RIQUELME PEREZ | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Neurospora crassa, Knock Out (KO), Retículo Endoplásmico (RE), cisternas de Golgi, complejo Coat Protein II (COPII), adaptador cargo, brefeldina A (BFA). Endoplasmic Reticulum (ER), Golgi cisternae, Coat Protein complex II (COPII), cargo adaptor, brefeldin A (BFA) | |
| Las hifas de los hongos filamentosos se extienden por crecimiento polarizado apical. Este fenómeno se sustenta por el transporte de vesículas secretoras dirigidas al ápice, donde la acumulación de macro y microvesículas dan lugar al Spitzenkörper (SPK). Estas vesículas proporcionan a la membrana plasmática y a la pared celular todos los componentes moleculares necesarios para su expansión. Las rutas secretoras aseguran el tráfico de moléculas a diferentes destinos celulares. El complejo Coat Protein II (COPII) está involucrado en la formación de vesículas secretoras con cubierta COPII derivadas del retículo endoplásmico (RE). Algunas de las proteínas involucradas en la formación de vesículas con cubierta COPII incluyen activadores de este complejo, proteínas de cubierta interna y externa de la vesícula y también a diferentes adaptadores cargo, como las proteínas transmembranales que pertenecen a la familia Cornichon (Cni/Erv14p). Cni de Drosophila melanogaster es requerida para la exportación eficiente del factor de crecimiento TGF Gurken (Grk) involucrado en la ovogénesis. Erv14p de Saccharomyces cerevisiae es el adaptador cargo específico para algunas proteínas, tales como la Axl2p, necesaria para establecer el crecimiento polarizado y el brote axial de la levadura. En este trabajo identificamos un ortólogo putativo de Cni/Erv14p en Neurospora crassa (CNI; NCU06922) y analizamos su esencialidad y su localización subcelular en hifas en crecimiento. Para evaluar la esencialidad de cni se realizó el Knock Out (KO) de este gen y se analizó el fenotipo de la cepa mutante resultante. cni en estado homocarión no fue viable, indicando que este gen es esencial para N. crassa. Se etiquetó a CNI con las proteínas fluorescentes GFP y mChFP, observándose que la proteína se distribuye en una red endomembranosa a lo largo de las hifas y cerca de la punta. Los ensayos de co-expresión entre CNI-GFP y dsRED-NCA-1, una ATPasa de tipo SERCA asociada al RE perinuclear, revelaron una co-localización parcial entre ambas proteínas en el RE cercano a la membrana nuclear. La co-expresión de CNI-GFP y CSE-7-mChFP, previamente identificada como un adaptador cargo para la quitina sintasa CHS-4, reveló una co-localización parcial de ambas proteínas en algunas regiones distintas de la Red de Cisternas Elongadas (NEC). CNI-GFP y mChFP-YPT-1, una Rab GTPasa previamente identificada en cisternas de Golgi tempranas y tardías y en el núcleo del SPK, co-localizaron parcialmente en ... Hyphae of filamentous fungi extend by apical polarized growth. This phenomenon is supported by the transport of secretory vesicles directed to the apex, where the accumulation of macro and microvesicles gives rise to the Spitzenkörper (SPK). These vesicles provide the plasma membrane and the cell wall with all the molecular components necessary for cell expansion. The secretory pathways ensure the traffic of molecules to different cellular destinations. The Coat Protein complex II (COPII) is involved in the formation of COPII secretory vesicles at the endoplasmic reticulum (ER). Some of the proteins involved in COPII vesicles formation include activators of this complex, the inner and outer vesicle coat proteins and different cargo adaptors, such as the transmembrane proteins belonging to the Cornichon (Cni/Erv14p) family. Drosophila melanogaster Cni is required for the efficient export of the growth factor TGF Gurken (Grk), involved in oogenesis. Saccharomyces cerevisiae Erv14p is the specific cargo adaptor for some proteins, such as Axl2p, required to establish polarized growth and axial budding. In this work, we identified a putative orthologue of Cni/Erv14p in Neurospora crassa (CNI; NCU06922) and analyzed its essentiality and its subcellular localization in growing hyphae. To evaluate the essentiality of cni, the phenotype of the corresponding Knock Out (KO) strain was analyzed. cni strains in homokaryon state were not viable, proving that this gene is essential for N. crassa. CNI tagged with GFP and mChFP was distributed as an endomembranous network along the hyphae and close to the tip. Co-expression assays between CNI-GFP and dsRED-NCA-1, a SERCA type ATPase associated with the perinuclear ER, showed a partial co-localization of both proteins at the ER close to the nuclear membrane. Co-expression of CNI-GFP and CSE-7-mChFP, previously identified as a putative cargo adaptor for chitin synthase CHS-4, revealed a partial co-localization of both proteins in some distinct regions of the Network of Elongated Cisternae (NEC). CNI-GFP and mChFP-YPT-1, a Rab GTPase previously identified at early and late Golgi cisternae and at the core of the SPK, co-localized partially at some of the Golgi cisternae. In addition, we tagged two COPII putative markers, SEC-16 and SEC-24. Co-expression of these markers and the different versions of CNI showed partial co-localization of CNI with these putative COPII markers. To verify the participation of CNI in COPII... | |
| CICESE | |
| 2018 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Sastré Velásquez, L.E. 2018. Identificación del homólogo a Cornichon/Erv14 y su papel en la regulación del crecimiento del hongo filamentoso Neurospora crassa. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 59 pp. | |
| BIOLOGÍA MOLECULAR DE MICROORGANISMOS | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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