Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem:
http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2601| Funcionalización de exosomas con las subunidades de integrinas αv y β5 mediante la modificación genética de células 293T Exosomes functionalization with integrins αv and β5 subunits by genetic modification in 293T cells | |
| ARTURO HERNANDEZ GARCIA | |
| PIERRICK GERARD JEAN FOURNIER | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| cáncer, nicho pre-metastático, exosomas, integrinas pre-metastatic niche, exosomes, integrins | |
| El cáncer es la proliferación de células sin control, la invasión por parte de éstas al tejido y su posterior diseminación a otros tejidos. Es un problema nacional y mundial por la alta incidencia y mortalidad. El principal culpable de las muertes por cáncer es la metástasis, mecanismo de la célula para invadir y formar tumores en tejidos secundarios. El proceso para que se genere metástasis es muy complicado, es por eso que las células cancerígenas necesitan la producción de moléculas como citocinas, factores de crecimiento y exosomas, que generarán un microambiente favorable para la proliferación de las células cancerígenas, conocido como el nicho pre-metastático. Los exosomas son nano-vesículas con membrana bilipídicas con tamaños de 30 a 150 nm que funcionan como medio de comunicación entre las células, llevando en su interior distintos tipos de moléculas. Además, los exosomas ayudan en la generación del nicho pre-metastático al interaccionar con el tejido secundario para colonizar, y las moléculas encargadas de darles el organotropismo son las integrinas. Se han realizado estudios con ingeniería en exosomas como tratamiento contra células cancerígenas. El objetivo del presente estudio es producir exosomas funcionalizados con sobre-expresión de las subunidades de las integrinas αv y β5, al modificar genéticamente células 293T para la sobre-expresión de éstas integrinas. En el presente trabajo se estandarizó el método de aislamiento de exosomas a partir de células en cultivo y se generaron dos plásmidos lentivirales, cada uno con la secuencia codificante de las subunidades αv y β5, para la transducción en las células 293T. Se realizó la modificación genética de las células 293T para la expresión de la integrina subunidad β5 y se aislaron exosomas a partir de cultivos de éstas células. Los exosomas se caracterizaron respecto al diámetro y presencia de proteínas, con diámetros de 100 nm. Finalmente se confirmó la presencia de la integrina subunidad β5. Cancer is the uncontrolled growth of cells, their complete tissue invasion and their spread to other tissues. It is a national and worldwide problem due to the high incidence and mortality. The principal cause of dead by cancer it is the metastasis, cell mechanism to invade and establish tumors in secondary tissues. It is very complicated to generate metastasis, that is why cancer cells need the emission of cytokines, growth factors and exosomes, this generate a favorable microenvironment to cancer cell proliferation known as pre-metastatic niche. The exosomes are membrane lipid bilayer nano-vesicles 30-150nm diameter. Exosomes function as cell communication carrying different kind of molecules. Exosomes interact with de secondary tissue to colonize helping in the pre-metastatic niche generation. Integrins are the molecules responsible to give the exosome’s organotropism. It have been showed studies with engineered exosomes as a treatment against cancer cells. The project aim is to produce functionalized exosomes with the integrins subunit αv y β5, genetic modifying 293T to overexpress these integrins. The exosome’s isolation method was standardized from cells in culture. Lentiviral expression plasmids were generated, one with the integrin αv subunit coding sequence and one with the integrin β5 subunit coding sequence. Genetic modification was made in 293T cells overexpressing the integrin β5 subunit and exosomes were isolated from this culture cells. The exosomes were diameter and protein presence characterized, with 100nm diameters and integrin β5 subunit presence in the exosomes. | |
| CICESE | |
| 2018 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Hernández García, A. 2018. Funcionalización de exosomas con las subunidades de integrinas αv y β5 mediante la modificación genética de células 293T. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 46 pp. | |
| CULTIVO CELULAR | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
Cargar archivos:
| Fichero | Descripción | Tamaño | Formato | |
|---|---|---|---|---|
| tesis_Hernández García ARturo_14_nov_2018.docx.pdf | Versión completa de la tesis | 3.02 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |