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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2631| Papel de la dopamina y de la neurohormona recombinante CHH-B1 en la modulación de respuestas fisiológicas en el camarón blanco Litopenaeus vannamei Role of the dopamine and the recombinant CHH-B1 neurohormone in the modulation of physiological responses in the white shrimp Litopenaeus vannamei | |
| Laura Camacho Jiménez | |
| Elizabeth Ponce Rivas Fernando Díaz Herrera | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Camarón blanco,Litopenaeus vannamei,Ciencias del mar | |
| La hormona hiperglucémica de crustáceos (CHH) es una de las neurohormonas más importantes sintetizadas en el órgano X-glándula del seno. De las diferentes CHH’s producidas en Litopenaeus vanammei, CHH-B1 ha mostrado actividad hiperglucémica, sin embargo no se descarta su participación en otras funciones como muda y osmoregulación. Por otra parte, se ha encontrado que aminas biogénicas como la dopamina regulan algunas respuestas fisiológicas de L. vannamei bajo condiciones de estrés. En el presente trabajo se llevó a cabo el estudio del papel de CHH-B1 recombinante con un extremo C-terminal adicional (CHH-B1His) y del impacto de la dopamina en la modulación de respuestas fisiológicas en la hemolinfa del camarón blanco L. vannamei bajo condiciones hiper-osmóticas. CHH-B1His fue expresada en P. pastoris y analizada mediante PAGE-SDS. Las condiciones óptimas para su expresión fueron 3 días de cultivo y 2% de metanol. La neurohormona fue escalada y purificada mediante cromatografía de afinidad obteniéndose un rendimiento de 5.72 mg/L. Se realizaron bioensayos con subadultos de L. vannamei aclimatados a 26 °C y 35 ‰, inyectando 2 µg de CHHB1His o 2x10-6 moles/camarón de dopamina en periodo de intermuda. La hemolinfa de camarones fue muestreada de manera individualizada a las 0.5, 1, 2, 4 y 24 h post-inyección para llevar a cabo la determinación de diferentes respuestas fisiológicas. CHH-B1His provocó un aumento significativo en la concentración de glucosa y triglicéridos de la hemolinfa, presentando valores máximos a 1 h y 2 h postinyección respectivamente. Así mismo, se observó una disminución significativa en los niveles de proteínas entre las 4 y 24 h post-tratamiento, mientras que la inyección de dopamina aumentó de manera significativa los niveles de glucosa en los camarones con un máximo registrado a 1 h post-inyección y disminuyó progresivamente los niveles de triglicéridos. Sin embargo, el neurotransmisor no tuvo efecto sobre los niveles de proteínas totales en la hemolinfa de los camarones. Ninguna de las dos sustancias aplicadas tuvo un efecto en la concentración de oxihemocianina, por lo que no se observaron cambios significativos en la relación oxihemocianina/proteínas totales en comparación con el control. El aumento en los niveles de glucosa por la inyección de CHH-B1His y dopamina sugiere que la hiperglucemia observada con dopamina estuvo mediada a través de CHH-B1His. Asimismo, CHH-B1His y dopamina ocasionaron un incremento en la presión osmótica de los organismos. Sin embargo, CHH-B1His provocó un aumento en la capacidad osmorreguladora contrario a la disminución observada en el tratamiento con dopamina. Estos resultados en conjunto sugieren que tanto la neurohormona CHH-B1His como la dopamina tuvieron un efecto metabólico en L. vannamei bajo condiciones hiper-osmóticas. Así mismo se sugiere que la neurohormona mejoró la capacidad de hipo-osmorregular de los organismos, y que la dopamina tuvo una posible función como neuromodulador en la activación de los mecanismos de osmorregulación. Crustacean hyperglycemic hormone (CHH) is one of the most important neurohormone synthesized in the X-organ sinus gland. From the differents CHH's produced in Litopenaeus vannamei, CHH-B1 had shown hyperglycemic activity; however their participation in other functions such as molt and osmoregulation has been not discarded. On the other hand, it has been found that biogenic amines like dopamine regulates some physiological responses of L. vannamei under stressfull conditions. In this work was carried out the study of the role of recombinant CHHB1 with an additional C-terminus end (CHH-B1His) and the impact of dopamine in the modulation of physiological responses in the hemolymph of the white shrimp L. vannamei under hyper-osmotic conditions. CHH-B1His was expressed in P. pastoris and analyzed by SDS-PAGE. The optimal conditions for expression were 3 days of culture and 2% methanol. The neurohormone was scaled up and purified by affinity chromatography obtaining a yield of 5.72 mg/L. Bioassays were conducted with sub-adult L. vannamei acclimated to 26 °C and 35 ‰, injecting 2 µg of CHH-B1His or 2x10-6 mol/shrimp of dopamine on intermolt period. The shrimp hemolymph was collected on an individual way at 0.5, 1, 2, 4 and 24 h post-injection to carry out the determination of different physiological responses. CHH-B1His caused a significant increase in glucose and triglycerides concentration, obtaining the highest values at 1 h and 2 h post-injection respectively and a significant decrease in protein was observed between 4 and 24 h post-treatment, whereas dopamine significantly increased the levels of glucose of the shrimps with a maximum at 1 h post-injection and gradually decreased the triglyceride levels. However, the neurotransmitter had no effect on total protein levels in the hemolymph of the shrimp. Neither of the two substances applied had an effect on the oxyhemocyanin content, so there were not significant changes observed in the oxyhemocyanin/total protein ratio compared with control. The increase in glucose levels by CHH-B1His injection and dopamine suggests that the hyperglycemic activity observed with dopamine is mediated through CHH-B1His. Also, CHH-B1His and dopamine caused an increase in osmotic pressure of the organisms. However, CHH-B1His produced an increase in osmoregulatory capacity contrary to the observed decrease in dopamine treatment. These results suggest that both CHH-B1His neurohormone and dopamine had a metabolic effect in L. vannamei under hyper-osmotic conditions. They also suggest that the neurohormone improved the hypo-osmoregulatory capacity of organisms, and that dopamine had a possible function as neuromodulator on the activation of the osmoregulation mechanisms. | |
| CICESE | |
| 2011 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Camacho Jiménez, L.2011.Papel de la dopamina y de la neurohormona recombinante CHH-B1 en la modulación de respuestas fisiológicas en el camarón blanco Litopenaeus vannamei.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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