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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/2677| Criopreservación de esperma del abulón rojo Haliotis rufrescens | |
| Liliana Salinas Flores | |
| Carmen Guadalupe Paniagua Chavez | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Abulón rojo,Esperma de abulón,Ciencias del mar | |
| El cultivo de abulón en Baja California, México es una industria floreciente que requiere de tecnologías de apoyo para un rápido desarrollo. La criopreservación de esperma ofrece una alternativa, no sólo a la acuicultura, sino también a la problemática de conservación de especies amenazadas o en peligro de extinción. En el presente trabajo se desarrollaron protocolos para el almacenamiento a corto plazo y de criopreservación de esperma del abulón rojo Haliotis rufescens. El esperma de abulón se activa al entrar en contacto con el medio acuático. Debido a que en otras especies uno de los factores que es el responsable de la activación del esperma es la acidez o alcalinidad del medio en que ocurra el desove, fue necesario realizar ensayos para determinar si soluciones con diferente pH podían desactivar el esperma de abulón. Se refrigeraron muestras de esperma fresco en soluciones con diferente pH durante una semana. Se verificó la motilidad diariamente antes de resuspender las muestras en agua de mar filtrada. Se encontraron diferencias significativas con respecto al tiempo de almacenamiento. La máxima motilidad, respecto al control, fue encontrada el día 1 para el esperma suspendido en agua de mar con pH 6 (88%) después de haber sido resuspendido. Sin embargo, no fue posible encontrar una solución desactivadora, por lo que no se considera que el pH sea el factor activador del esperma de abulón rojo. El esperma de abulón rojo puede mantenerse móvil bajo refrigeración y concentrado en un pequeño volumen de agua de mar filtrada. Las sustancias crioprotectantes tienen un efecto tóxico en las células, por lo que este efecto tóxico agudo se determinó al suspender esperma fresco en soluciones de dimetil sulfóxido (DMSO), propilen glicol (PG) y glicerol (Gly) en concentraciones de 5, 10, 15, y 20% durante tiempos de equilibrio de 5, 10, 15, 20, 25, y 30 min. Se observó una motilidad máxima de 88% ± 0.58 utilizando DMSO 5% durante 5 min. Asimismo, se observó una tendencia a la disminución en la motilidad al aumentar la concentración de crioprotectante y tiempo de equilibrio para el esperma suspendido en las tres soluciones. Se observaron diferencias significativas entre crioprotectantes, concentraciones y tiempos de equilibrio (P< 0.05). Específicamente, para los casos del DMSO y Gly, no se encontraron diferencias significativas entre las concentraciones de 5% y 10% para el esperma incubado por 5 y 10 minutos. Tampoco se encontraron diferencias significativas entre la motilidad del esperma suspendido en Gly 5% a lo largo del tiempo (P > 0.05). No obstante lo anterior, se consideró que las soluciones crioprotectantes más adecuadas para la criopreservación de esperma de abulón rojo son DMSO 10% y Gly 10%. La criopreservación de muestras se llevó a cabo en cámaras de congelamiento del método simplificado (MS), programado (CP) y comercial (GNX). Se utilizaron tres parámetros para evaluar la viabilidad del esperma criopreservado: motilidad, viabilidad de acuerdo a células teñidas con SYBR 14® y yoduro de propidio y analizadas por citometría de flujo, y la tasa de fertilización. La mayor motilidad observada (48 ± 7%) correspondió a las muestras congeladas utilizando Gly 10% en la cámara de congelación MS, mientras que la máxima viabilidad de células espermáticas analizadas en el citómetro de flujo fue observada para las muestras congeladas en GNX (48 ± 2%), utilizando 10% DMSO. En cuanto a la tasa de fertilización, se observó una tasa máxima para muestras congeladas en GNX (29 ± 10%), utilizando Gly 10%. Abalone culture in Baja California, México is a flourishing industry that requires supporting technologies. Sperm cryopreservation offers an alternative, not only to aquaculture, but also to solve conservation problems of endangered species. In this project, protocols for the short term storage and cryopreservation of red abalone sperm Haliotis rufescens were developed. Abalone sperm becomes active as soon asit is released into sea water. In other aquaticspecies, one of the factors involved in sperm activation is the acidity or alkalinity of thewater in which gametes are spawned. For this reason, it was necessary to find a solution bytesting different pH which would be able to inactivate sperm once spawned. Samples offresh sperm were refrigerated for a week in different pH solutions. Motility was observeddaily before and after resuspension of the samples in filtered sea water. Significant differences were found regarding time of storage. Regarding the treatments, the highest motility, was found on day 1 for samples of sperm resuspended in sea water with pH 6 (88%). However, it was notpossible to find an inactivating solution, therefore,it is thoughtthat pH is not aninactivating factor for abalone sperm. Red abalone sperm can mantain its motile capability for six days derrefrigeration at high concentrations and suspendedinsmall amounts of filtered sea water. Pryoprotectant solutions have a toxic effect on cells. Thus, the acute toxic effect of cryoprotectants was determined by suspending samplesoffresh abalone sperm in dimethylsulfoxide (DMSO), propylene glycol (PG) or glycerol (Gly) solutions at concentrations of5, 10, 15 and 20% for equilibration times of 5, 10, 15, 20, 25 and 30 min. The highest motility was observed in samples suspended for 5 min in 5% DMSO (88 + 0.58%). Adecrease in motility was observed as the concentration and equilibration time increased forthe three cryoprotective solutions. Significant differences were found amongcryoprotectants, concentrations and equilibration times (P < 0.05). Specifically, nosignificant differences were found for 5 and 10% DMSOorGlyfor sperm incubated for 5 and 10 min. Also, no significant differences were found in the motility of sperm suspendedin 5% Gly throughout time (P < 0.05). The optimum cryoprotective solutions for the ryopreservation of red abalone sperm are 10% DMSO and Gly. | |
| CICESE | |
| 2003 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Salinas Flores, Liliana.2003.Criopreservación de esperma del abulón rojo Haliotis rufrescens.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.103 pp. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias |
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