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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/3249| Genotipificación del virus del moquillo canino aislado de perros enfermos y su relación con la eficacia del tratamiento antiviral con nanopartículas de plata Genotyping of canine distemper virus isolated from sick dogs and its relationship to the efficacy of antiviral treatment with silver nanoparticles | |
| CESAR AUGUSTO GARCIA AGUIRRE | |
| KARLA OYUKY JUAREZ MORENO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| moquillo canino; AgNPs; RT-PCR; genotipificación; N-glicosilación canine distemper; AgNPs; RT-PCR; genotype; N-glycosylation | |
| El virus de moquillo canino causa una enfermedad de distribución mundial siendo la más difundida, contagiosa y letal en cánidos. Las nanopartículas de plata (AgNPs) poseen actividad antiviral contra un amplio espectro de virus, disminuyendo su infectividad in vitro, lo cual se ha sugerido que se debe a una interacción directa entre las AgNPs y las proteínas de la superficie viral. En este trabajo, se colectaron muestras biológicas de pacientes con signología sugestiva de moquillo para aislar ARN, diagnosticar y genotipificar mediante RT-PCR el virus del moquillo canino. El diagnóstico se realizó amplificando el gen n y la genotipificación mediante los genes f y h del virus, los amplicones obtenidos, se secuenciaron y se compararon con la cepa vacunal Onderstepoort. Los resultados permitieron diagnosticar a 12 de pacientes, de los cuales 8 fueron tratados por via oral con AgNPs. Se demostró que existen dos genotipos circulantes en la ciudad de Ensenada, Baja California: América 3 y “tipo-Rockborn”. De los pacientes diagnositicados y tratados con AgNPs, 6 de ellos pertenecieron al genotipo América 3 y solamente 1 paciente al genotipo “tipo-Rockborn”, el cual fue el único que sobrevivió a la infección viral. Las secuencias de los fragmentos de los genes f y h de los genotipos aislados, presentaron diferencias significativas respecto de la cepa vacunal, los cambios más importantes consisten en que el genotipo América 3 cuenta con un mayor número de N-glicosilaciones y cisteínas en la proteína F, lo cual le brinda una mayor estabilidad. Por el contrario, la proteína F del genotipo “tipo-Rockborn”, presenta una menor cantidad de N-glicosilaciones y un menor número de cisteínas, por lo que puede ser susceptible a la desnaturalización por la unión de las AgNPs. Esta puede ser la razón del efecto antiviral eficaz de las AgNPs, ya que los pacientes en los que se aisló el genotipo America 3, no sobrevieron a la infección aún después de haber sido tratados con AgNPs. Sin embargo, el paciente infectado con el virus de moquillo “tipo-Rockborn” sobrevivió sin secuelas asociadas a la infección viral. Por lo tanto, una de las mayores contribuciones de este estudio fue el determinar que la eficacia del tratamiento antiviral con AgNPs puede relacionarse con el genotipo del virus con el que se infecte el paciente. Canine distemper virus causes a disease of worldwide distribution being the most widespread, contagious and lethal in canids. Silver nanoparticles (AgNPs) exhibited an effective antiviral activity against a broad spectrum of viruses, thus decreasing their infectivity in vitro, which has been suggested to be due to a direct interaction between AgNPs and viral surface proteins. In this work, biological samples were collected from patients with suggestive signs of distemper to isolate RNA, diagnose and genotype the canine distemper virus by RT-PCR. The diagnosis was achieved by amplifying the n gene while genotyping was made using the F and H genes of the virus. The obtained amplicons were sequenced and compared with the vaccine strain Onderstepoort. The results of this work allowed the diagnosis of 12 patients, of which 8 were treated with AgNPs. It was shown that there are two different circulating genotypes in the city of Ensenada, Baja California: América 3 and Rockborn-like. From all the patients treated with AgNPs, 6 of them belonged to the America 3 genotype and only 1 patient to Rockborn-like genotype, this was the only patient who survived the viral infection. In comparison to the vaccine strain, the sequences of gene fragments f and h isolated from patient showed significant differences. Some of the most important changes were that the America 3 genotype has a greater number of N-glycosylations and cysteines in the F protein providing a greater stability. In contrast, the F protein of Rockborn-like genotype has a smaller amount of N-glycosylations, as well as a lower number of cysteines, beging more susceptible to its denaturation by the AgNPs binding. This may be one of the reasons for the effective antiviral effect of AgNPs since the patients in whom genotype America 3 was isolated, did not survive the infection with the virus even after being treated with AgNPs. However, the patient infected with the Rockborn-type virus survived without any sequelae associated with the viral infection. Therefore, one of the major contributions of this study was to determine that the efficacy of treatment with AgNPs could be related to the genotype of the virus with which the patient is infected. | |
| CICESE | |
| 2018 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| García Aguirre, C.A. 2018. Genotipificación del virus del moquillo canino aislado de perros enfermos y su relación con la eficacia del tratamiento antiviral con nanopartículas de plata. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 96 pp. | |
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