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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/3716| Inhibición del TGF-Beta por medio de exosomas cargados con mRNA de betaglicano soluble Inhibition of TGF-Beta by exosomes containing soluble betaglycan mRNA | |
| OSCAR COLUNGA FLORES | |
| Patricia Juárez Camacho PIERRICK GERARD JEAN FOURNIER | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Cáncer, páncreas, nicho pre-metastásico, exosomas, TGF-β, betaglicano Cancer, pancreas, pre-metastatic niche, exosomes, TGF-β, betaglycan | |
| El cáncer pancreático es la novena causa de muerte debida a cáncer a nivel mundial. Su alta mortalidad se atribuye al diagnóstico tardío, resistencia al tratamiento y baja resecabilidad. Sin embargo, la mayoría de las muertes por cáncer pancreático se deben a la metástasis, un proceso donde las células cancerosas se diseminan a otros tejidos, formando un nuevo tumor. El tumor primario induce la formación a distancia de un microambiente que le permite sobrevivir y crecer en el nuevo tejido, que se denomina nicho premetastásico. El factor de crecimiento transformante beta (TGF-β), es una citocina multifuncional que, junto con otros factores, participa en la regulación de la metástasis. Los exosomas del tumor primario inducen la producción local de TGF-β, conduciendo a un proceso de fibrosis que favorece la colonización hepática por células metastásicas. El betaglicano, uno de los co-receptores del TGF-β, tiene afinidad y en su forma soluble, tiene capacidad para neutralizar al TGF-β. Este proyecto tiene como objetivo producir exosomas dirigidos al hígado, cargados con ARNm de betaglicano soluble para inhibir la formación del nicho pre-metastásico. Para esto, se transdujeron células 293T-αvβ5 para producir el ARNm del betaglicano soluble unido a una etiqueta c-myc. Se seleccionaron las células transducidas con puromicina y se confirmó la expresión del BGs-Myc en los medios condicionados por Western-Blot. La citometría de flujo mostró un 26% de células que expresaban BGs-Myc, por lo que se realizó una dilución límite para obtener sub-clonas, de las que se seleccionaron dos con la mayor expresión de la molécula. Se confirmó la capacidad del BGs-Myc en los medios condicionados para unirse al TGF-β2 con un ensayo de marcado por afinidad, así como su capacidad para inhibir la cascada de señalización del TGF-β en células HepG2 de hepatocarcinoma humano. Por último, se aislaron exosomas secretados por las células transducidas, pero no hubo detección del ARN mensajero del betaglicano soluble en los exosomas, por lo que se sigue trabajando en la optimización del método de obtención de vesículas extracelulares. Sin embargo, los resultados sugieren que la molécula obtenida puede utilizarse para neutralizar al TGF-β e inhibir su cascada de señalización. Pancreatic cancer is the 9th cause of cancer-related deaths worldwide. The high mortality of this disease is due to late diagnosis, resistance to therapy and low resectability. Nevertheless, most of the pancreatic cancer-related deaths are caused by metastasis, a process where tumor cells disseminate to other tissues, with the formation of a new tumor. The primary tumor induces the distant formation of a permissive environment that allows it to survive and grow in a new tissue, known as the pre-metastatic niche. Transforming growth factor beta (TGF-β) is a multifunctional cytokine that, along with other factors, participates in the regulation of metastasis. The exosomes of the primary tumor induce the local upregulation of TGF-β in the liver, leading to fibrosis that increases the colonization by metastatic cells. Betaglycan, one of the TGF-β co-receptors, has a high affinity, and, in its soluble form, the potential to neutralize TGF-β. The aim of this study is to produce liver-directed exosomes, that carry mRNA of soluble betaglycan to inhibit the formation of the hepatic pre-metastatic niche. For this, 293T-αvβ5 cells were transduced to produce mRNA of soluble betaglycan containing a c-myc epitope. Transduced cells were selected in puromycin and secretion of soluble betaglycan in conditioned media was confirmed by Western-blot. Flow cytometry showed that 26% cells were expressing BGs-Myc, therefore, a limit dilution assay was performed to obtain sub-clones, of which two of them had the highest expression of the molecule. The binding of BGs-Myc in conditioned media for TGF-β2 was confirmed through an affinity labeling assay, as well as its capacity to inhibit the TGF-β signaling pathway in HepG2 human hepatocarcinoma cells. Finally, exosomes from the transduced cells were isolated, but no soluble betaglycan mRNA was detected. Therefore, ongoing work is focused on opmitizing the isolation of extracellular vesicles. Nevertheless, the results suggest that the obtained molecule can be used to neutralize TGF-β and inhibit its signaling pathway. | |
| CICESE | |
| 2022 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Colunga Flores, O. 2022. Inhibición del TGF-Beta por medio de exosomas cargados con mRNA de betaglicano soluble. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 60 pp. | |
| OTRAS | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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