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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/3796| Criopreservación de tejido gonadal del robalo blanco Centropomus viridis: efecto de crioprotectores penetrantes y no penetrantes en la viabilidad de las células germinales Cryopreservation of gonadal tissue of White snook Centropomus viridis: Effect of penetrant and non-penetrant cryoprotectants on the viability of germ cells | |
| Galilea de Jesús Fonseca González | |
| Carmen Guadalupe Paniagua Chávez MARISELA AGUILAR JUAREZ | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Criopreservación, Centropomus viridis, tejido gonadal, células germinales, VASA Cryopreservation, Centropomus viridis, gonadal tissue, germ cells, VASA | |
| El robalo blanco Centropomus viridis es una de las pesquerías artesanales más importantes en el noroeste de México, por lo que se busca optimizar su cultivo en cautiverio para satisfacer la demanda comercial. La criopreservación permite conservar el germoplasma por tiempo ilimitado, y en conjunto con técnicas de trasplante, podría contribuir a apoyar los programas de reproducción asistida en peces. Dadas las complicaciones para criopreservar huevos y larvas de peces y que la conservación de material genético del esperma es incompleta, por ser células haploides, se ha propuesto la criopreservación de las células germinales (CG). Sin embargo, los protocolos de criopreservación de CG para peces marinos son escasos. Por tanto, el objetivo de esta tesis fue desarrollar un protocolo de criopreservación de tejido gonadal de robalo. La criopreservación se realizó con etilenglicol (EG) o dimetilsulfóxido (DMSO) a concentraciones de 1.5 M o 2 M, o la combinación de 1.5 M DMSO, lactosa (0.1 o 0.2 M) y 10% yema de huevo. El tejido gonadal se congeló a -80°C durante 10, 15 o 30 minutos. La disgregación del tejido se realizó con tripsina (0.25%, 0.30%, 0.40% o 0.50%), y las CG se aislaron con un gradiente de densidades del 10% y 40% de Percoll. La viabilidad celular se evaluó con diacetato de fluoresceína y yoduro de propidio. Las CG se identificaron con el marcador VASA mediante inmunocitoquímica. En el tejido gonadal descongelado de robalo, la mayor viabilidad (72%) se observó cuando se congelaron con 2 M DMSO a -80°C por 15 minutos. La concentración de tripsina 0.25% fue elegida para la disgregación celular. Las CG se aislaron en la banda de Percoll al 10%. En dicha banda se observó el 36% de células con expresión de VASA. Este protocolo logró una viabilidad >50% en todos los tratamientos, y una alta concentración celular. Por lo tanto, este estudio establece una línea base para realizar futuros protocolos de criopreservación de tejido gonadal de peces marinos. Se propone como futuros estudios el trasplante de CG criopreservadas de robalo en organismos subrogados además de estudios de criopreservación de otras especies de robalo. The white snook Centropomus viridis is one of the most important artisanal fisheries in the northwest of Mexico. Therefore, it sought to optimize its culture in captivity to satisfy commercial demand. Cryopreservation allows germplasm to be preserved for an unlimited time, and together with transplant techniques, it could contribute to supporting assisted reproduction programs in fish. Given the complications of freezing fish eggs and larvae and the preservation of genetic material in sperm is incomplete, as they are haploid cells, cryopreservation of germ cells (GCs) has been proposed. However, GCs cryopreservation protocols for marine fish are scarce. Therefore, the objective of this thesis was to develop a cryopreservation protocol for White snook gonadal tissue. Cryopreservation was performed with ethylene glycol (EG) or dimethyl sulfoxide (DMSO) at concentrations of 1.5 M or 2 M, or the combination of 1.5 M DMSO, lactose (0.1 or 0.2 M), and 10% egg yolk. Gonadal tissue was frozen at -80°C for 10, 15, or 30 minutes. Tissue disaggregation was performed with trypsin (0.25%, 0.30%, 0.40% or 0.50%), and GCs were isolated with a density gradient of 10% and 40% Percoll. Cell viability was assessed with fluorescein diacetate and propidium iodide. The GCs were identified with the VASA marker by immunocytochemistry. In thawed White snook gonadal tissue, the highest viability (72%) was observed when frozen with 2 M DMSO at -80°C for 15 minutes. A trypsin concentration of 0.25% was chosen for cell disaggregation. GCs were isolated on the 10% Percoll band, and 36% of cells with VASA expression were observed. This protocol achieved >50% viability in all treatments and high cell concentration. Therefore, this study establishes a baseline for future gonadal tissue cryopreservation protocols in marine fish. The transplantation of cryopreserved GCs of White snook in surrogate organisms and the conservation of other snook species are suggested as future research. | |
| CICESE | |
| 2022 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Fonseca González, G.J. 2022. Criopreservación de tejido gonadal del robalo blanco Centropomus viridis: efecto de crioprotectores penetrantes y no penetrantes en la viabilidad de las células germinales. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 51 pp. | |
| REPRODUCCIÓN | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Acuicultura |
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| tesis_Galilea de Jesus Fonseca Gonzalez_14 nov 2022.pdf | Versión completa de la tesis | 1.21 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |