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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/3811| Caracterización del efecto de los linfocitos T en la osteoclastogénesis y el desarrollo de la metástasis ósea bajo el control del microambiente tumoral en modelos murinos Characterization of the effect of T cells during osteoclastogenesis and the development of bone metastasis under the control of the tumor microenvironment in mice | |
| DANNA LYN ARELLANO RODRIGUEZ | |
| PIERRICK GERARD JEAN FOURNIER | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Cáncer de mama, Linfocitos T, Inmunoterapia, Inmuno-oncología Breast cancer, T cells, Inmunotherapy, Oncoinmunology | |
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La metástasis ósea es una complicación común en pacientes en estados avanzados de cáncer de mama y de próstata. Los tratamientos actuales son paliativos, tratamientos como la inmunoterapia basada en linfocitos T son muy prometedores para el tratamiento del cáncer, sin embargo, se desconoce si podría beneficiar a los pacientes con metástasis ósea. Como modelo singénico, utilizamos las células de cáncer de mama 4T1 para causar metástasis ósea en ratones, Balb/C. Los ratones con un sistema inmune normal, presentaron un incremento significativo en la metástasis osteolítica al compararlos con ratones sin linfocitos T (p<0.05). Se confirmó por histomorfometría que el área del hueso era menor, y se incrementó el número de osteoclastos en la interface tumor hueso en ratones con linfocitos T. Ensayos ex vivo los linfocitos T aislados de metástasis ósea de células 4T1 incrementaron la osteoclastogénesis, lo cual es consistente con la expresión de Rankl y Tnfα mRNA. Sin embargo, este efecto pro-osteoclástico esta específicamente relacionado con los linfocitos T no activados, ya que los linfocitos T activados inhiben la formación de osteoclastos. Confirmamos que los linfocitos T en la metástasis ósea de células 4T1 no están activados, ya que >85% de los linfocitos T no presentan el marcador de activación temprano CD69, ni perdieron el marcador CD62L. Tratamientos ex vivo con ConA o anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28 indujeron la activación de los linfocitos T de bazo, pero no lograron activar a los linfocitos T provenientes de la metástasis ósea. Esto sugiere que la inmunosupresión es inducida por el microambiente, lo cual podría deberse al incremento en la cantidad de células de origen mieloide supresoras (MDSCs), en la metástasis ósea de células 4T1. Se confirmó que las MDSC producen ROS y NO, productos que suprimen la actividad de los linfocitos T. Tratamiento con Sildenafil, un inhibidor de la PDE5, ha sido reportado como un inhibidor de las MDSCs. Sin embargo, el tratamiento con Sildenafil no tuvo efecto en la metástasis ósea de células 4T1, ni mejoro el efecto del ácido zoledrónico. Por lo que buscamos otros blancos terapéuticos, como los puntos de control inmunológicos. Encontramos que solo el 27% de los linfocitos T en la metástasis ósea son CTLA-4+, >70% de los linfocitos T son PD-1+, y el 80% de las MDSCs monocíticas fueron PD-L1+, lo cual puede inhibir la activación de los linfocitos T en el hueso. En conclusión, encontramos que los linfocitos T.... Bone metastases are a complication in advanced breast and prostate cancer patients. Bone metastases cannot be cured, with current treatments and treatments such as T cell-based immunotherapy is very promising for the treatment of cancer although remains unclear whether immunotherapy could benefit patients. Despite that, it is unclear what would be the effect of the bone microenvironment on T cells. Thus, we aim to characterize the effect of T cells in breast cancer bone metastases. As a syngeneic model, we used 4T1 breast cancer cells to cause bone metastases in mice. In normal Balb/C mice, osteolytic metastasis was increased when compared to T-cell depleted mice (x1.6, p<0.05). Histomorphometry confirmed that the number of osteoclasts was increased at the tumor/bone interface in mice with T cells. Ex vivo, T cells isolated from 4T1 bone metastases increased osteoclastogenesis, consistent with the expression of Rankl and Tnfa mRNA. However, this pro-osteoclastic effect was specific of the non-activated T cells, as activated T cells inhibited the formation of osteoclasts ex vivo. Using flow cytometry, we confirmed that T cells in bone metastases are not activated, as >85% of T cells lacked the activation marker CD69. Thus, immunotherapy activating T cells could benefit patients with bone metastases. While ConA or anti-CD3/CD28 antibodies activated T cells from the spleen ex vivo, they failed to activate T cells from bone metastases. This suggests microenvironment-induced immunosuppression that could be due to an increase of myeloid-derived suppressor cells (MDSC), monocytic (CD11b+Ly6C+Ly6Glow), and polymorphonuclear (CD11b+Ly6G+Ly6Clow), in 4T1 bone metastases. CellROX and DAF2-DA assays confirmed that these MDSCs produced ROS and NO that suppress T cells. The PDE5 inhibitor, Sildenafil, was reported to inhibit MDSCs. However, treatment with Sildenafil did not decrease 4T1 bone metastases nor improved the effect of zoledronate. Thus, we looked for other therapeutic targets, such as immune checkpoints. Although only 27% of T cells in 4T1 bone metastases were CTLA-4+, >70% of T cells were PD-1+, and 80% of monocytic-MDSCs were PD-L1+, which could trigger T cell suppression in bone. In conclusion, we found that T cells inactivated in the bone metastasis microenvironment increase osteoclast formation and bone metastases, while activated T cells inhibit osteoclastogenesis. Although targeting MDSCs with Sildenafil was not efficient, treatment with immune ... | |
| CICESE | |
| 2023 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| Arellano Rodríguez, D.L. 2023. Caracterización del efecto de los linfocitos T en la osteoclastogénesis y el desarrollo de la metástasis ósea bajo el control del microambiente tumoral en modelos murinos. Tesis de Doctorado en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 106 pp. | |
| CULTIVO DE TEJIDOS | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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