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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/4084| Evaluación de la actividad antiproliferativa de α-conotoxinas en células de cáncer cervicouterino Evaluation of the antiproliferative activity of α-conotoxins in cervical cancer cells | |
| Poulette Carolina Álvarez Rosales | |
| Alexei Fedorovish Licea Navarro | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| cáncer cervicouterino, α-conotoxinas, receptores nicotínicos de acetilcolina, viabilidad celular, apoptosis cervical cancer, α-conotoxins, nicotinic acetylcholine receptors, cell viability, apoptosis | |
| El cáncer se desarrolla debido a la acumulación de mutaciones que desencadenan el aumento en la proliferación y la resistencia a la apoptosis. Estas mutaciones pueden estar vinculadas a la desregulación en la expresión de receptores nicotínicos de acetilcolina (nAChR) en células cancerosas. En consecuencia, ciertas investigaciones se han enfocado en la búsqueda de antagonistas de nAChR, como las α-conotoxinas debido a su selectividad hacia los nAChR. En este proyecto, se evaluó la actividad antiproliferativa de doce α-conotoxinas sintéticas sobre cuatro líneas celulares de cáncer cervicouterino (Hela, SiHa, C-33A y Ca-Ski) con expresión de distintas subunidades de nAChR. La identificación de los nAChR se realizó mediante la extracción y la retrotranscripción del ARN celular. Una vez obtenido el ADNc, se amplificaron las distintas subunidades de los receptores nAChR. Los resultados mostraron que las cuatro líneas celulares comparten la subunidad α5; mientras que solo la subunidad α9 y α4 se expresaron en HeLa y C-33A, respectivamente. Posteriormente, se evaluó el efecto de las α-conotoxinas en la viabilidad celular utilizando un ensayo colorimétrico. Los resultados mostraron que para HeLa, SiHa y Ca-Ski, las α-conotoxinas empleadas no tuvieron un efecto significativo con respecto al control negativo (p>0.05), mientras que en C-33A las α-conotoxinas xm1b y Vc1.1 disminuyeron el porcentaje de viabilidad un 40% (p=0.0001) y un 15% (p=0.0210), respectivamente, a una concentración de 50 μM. A partir de los efectos observados en xm1b y Vc1.1, se procedió a realizar una ensayo a distintas concentraciones para evaluar la dosis-respuesta en C-33A. A partir de los valores obtenidos en los ensayos posteriores, se seleccionó la concentración de 105 μM para xm1b y 8.8 μM para Vc1.1 debido a su capacidad para disminuir el porcentaje de viabilidad celular (p<0.005). Finalmente, se determinó el tipo de muerte celular mediante microscopia de fluorescencia. Ambas conotoxinas provocaron la activación del marcador caspasas 3/7, lo que sugiere una muerte celular por apoptosis, y la permeabilización del yoduro de propidio, resultado de la pérdida de la integridad membranal. El efecto que induce xm1b y Vc1.1 en C-33A se atribuye a la presencia exclusiva de la subunidad α4 en C-33A. Cancer develops through to the accumulation of mutations that trigger increased proliferation and resistance to apoptosis. These mutations may be linked to the dysregulation in the expression of nicotinic acetylcholine receptors (nAChR) in cancer cells. Consequently, certain research has focused on the search for nAChR antagonists, such as α-conotoxins, due to their selectivity towards nAChR. In this project, the antiproliferative activity of twelve synthetic α-conotoxins on four cervical cancer cell lines (HeLa, SiHa, C-33A, and Ca-Ski) with expression of different nAChR subunits was evaluated. The identification of expressed nAChR was performed through cellular RNA extraction and retrotranscription. Once the cDNA was obtained, the different subunits of the nAChR receptors were amplified. The results showed that the four cell lines shared the α5 subunit, while only the α9 and α4 subunits were expressed in HeLa and C-33A, respectively. Subsequently, the effect of the α-conotoxins on cell viability was evaluated using a colorimetric assay. Results indicated that for HeLa, SiHa, and Ca-Ski cell lines, the α-conotoxins used did not have a significant effect compared to the negative control (p>0.05), while in C-33A, the α-conotoxins xm1b and Vc1.1 decreased cell viability by 40% (p=0.0001) and 15% (p=0.0210), respectively, at a concentration of 50 μM. Following the observed effects of xm1b and Vc1.1, a dose-response assay was performed at different concentrations to evaluate their effect on C-33A. From the obtained values, the concentration of 105 μM for xm1b and 8.8 μM for Vc1.1 was selected for subsequent assays due to their ability to decrease cell viability (p<0.005). Finally, fluorescence microscopy assays were conducted to determine the type of cell death. Both conotoxins induced activation of the caspase 3/7 marker, suggesting cell death by apoptosis, and propidium iodide permeabilization, indicative of loss of membrane integrity. The effect induced by xm1b and Vc1.1 in C-33A is attributed to the exclusive presence of the α4 subunit in C-33A. | |
| CICESE | |
| 2024 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Álvarez Rosales, P.C. 2024. Evaluación de la actividad antiproliferativa de α-conotoxinas en células de cáncer cervicouterino. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 60 pp. | |
| CULTIVO CELULAR | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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| tesis_Poulette Carolina Álvarez Rosales_06 mar 2024_BIB.pdf | Versión completa de la tesis | 3.23 MB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |