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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/4096| Encapsidación de la L-asparaginasa de Rhizobium etli en partículas del bacteriófago P22 y análisis estructural de la doble mutante M253L-G290D Encapsulation of Rhizobium etli L-asparaginase in bacteriophage P22 particles and structural analysis of the M253L-G290D double mutant | |
| María Fernanda Gutiérrez Chávez | |
| ALEJANDRO HUERTA SAQUERO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| asparaginasa (ASNasa), leucemia linfocítica aguda (LLA), encapsidación, bacteriófago P22, enzima, partícula tipo virus (VLP) asparaginase (ASNase), acute lymphoblastic leukemia (ALL), encapsidation, bacteriophage P22, enzyme, virus-like particle (VLP) | |
| La leucemia linfocítica aguda (LLA) es una enfermedad caracterizada por la proliferación incontrolada de células inmaduras del linaje linfoide y representa el tipo de cáncer más frecuente en niños y adolescentes mexicanos. La enzima L-asparaginasa (L-ASNasa) de Escherichia coli se ha empleado exitosamente para el tratamiento de la LLA. Los inconvenientes de las formulaciones actuales se deben a la generación de respuesta inmune hacia la enzima, efectos tóxicos dados por la actividad secundaria de glutaminasa y la susceptibilidad a proteólisis por las enzimas lisosomales de las células cancerosas. Para superar las limitaciones de las formulaciones comerciales, se han buscado nuevas L-ASNasas nativas de otros microorganismos, la modificación estructural de la enzima y el diseño de nuevas estrategias de nanoencapsulación de la enzima. Este trabajo propone la encapsidación de la L-ASNasa con nula actividad glutaminasa proveniente Rhizobium etli en partículas tipo virus (VLPs) del bacteriófago P22. Se obtuvieron nanoreactores denominados ASNasa-P22 de un tamaño aproximado de 70.82 nm (± 17.84 nm) que contienen en su interior un promedio de 22 asparaginasas diméricas encapsuladas por 420 proteínas de capa. Los nanorreactores ASNasa-P22 resultaron catalíticamente inactivos, debido a dos mutaciones puntuales M253L-G290D presentes en la asparaginasa, que, a pesar de estar lejos del sitio activo, modifican la distancia entre los residuos catalíticos. Se presentan los resultados del análisis bioinformático de la estructura de la asparaginasa mutante y sus implicaciones funcionales. Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a disease characterized by the uncontrolled proliferation of immature cells and represents the most common type of cancer in Mexican children and adolescents. The enzyme L-asparaginase (L-ASNase) from Escherichia coli has been successfully used to treat ALL. The drawbacks of current formulations include the immune response generated against the enzyme, toxic effects caused by the secondary glutaminase activity, and susceptibility to proteolysis by the lysosomal enzymes of cancer cells. To overcome the limitations of commercial formulations, new native L-ASNases from other microorganisms have been sought, along other approaches such as the structural modification of the enzyme and the design of new nanoencapsulation strategies for the enzyme. This work proposes the encapsulation of L-ASNase with null glutaminase activity from Rhizobium etli in virus-like particles (VLPs) of the bacteriophage P22. Nanoreactors ASNase-P22 were obtained with an approximate size of 70.82 nm (± 17.84 nm) containing an average of 22 dimeric asparaginases encapsulated by 420 coat proteins. The ASNase-P22 nanoreactors were catalytically inactive, due to two-point mutations M253L and G290D present in the asparaginase, which, despite being far from the active site, modify the distance between the catalytic residues. The results of the bioinformatic analysis of the structure of the mutant asparaginase and its functional implications are presented. | |
| CICESE | |
| 2024 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Gutiérrez Chávez, M.F. 2024. Encapsidación de la L-asparaginasa de Rhizobium etli en partículas del bacteriófago P22 y análisis estructural de la doble mutante M253L-G290D. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 53 pp. | |
| BACTERIÓFAGOS | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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| María Fernanda Gutiérrez Chávez_22 mar 2024.pdf | Versión completa de la tesis | 256.01 kB | Adobe PDF | Visualizar/Abrir |