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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/577| Studies of fluorophores in a fluorescence microscopy system. Estudios de fluorósforos en un sistema de microscopía de fluorescencia. | |
| Beatriz Alina Juárez Alvarez | |
| Kevin Arthur O'Donnell | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Fluorósforos | |
| El propósito de este trabajo fue investigar los parámetros teóricos y experimentales involucrados al hacer mediciones de fluorescencia inducida en muestras de fluoróforos en la escala microscópica. El fluoróforo utilizado fue Rodamina B con metanol como solvente. Se hizo una revisión bibliográfica de los fundamentos de la fluorescencia, los parámetros involucrados, y las características del fluoróforo utilizado. La distribución espacial de la intensidad cerca del foco de un objetivo de microscopio con abertura numérica baja iluminado con un haz Gaussiano truncado fue calculada utilizando el método descrito por Horvath y Bor (2003). Posteriormente, se diseñó y construyó un sistema de microscopía de fluorescencia con dos posibles geometrías (epifluorescencia y geometría 4pi). Esto permitió investigar la influencia de parámetros relacionados con la muestra, como son la concentración y el espesor. También permitió estudiar los efectos de los parámetros del sistema, tales como la longitud de onda de excitación, la posición de enfoque del objetivo de microscopio, el uso de fuentes de excitación continua o pulsada, y la geometría del sistema de colección. Entre los resultados obtenidos, el uso de la geometría 4pi y la cuidadosa selección de los parámetros estudiados permitió señales observables de fluorescencia usando potencia de excitación incidente en la muestra de tan solo 0.5 nW. Información sobre la intensidad de saturación se extrajo de los datos obtenidos con el láser pulsado, lo cual permitió determinar la sección transversal de excitación del fluoróforo. The purpose of this work was to investigate the theoretical and experimental parameters involved in fluorescence induced in liquid fluorophore samples at a microscopic scale. The fluorophore used was Rhodamine B with methanol as the solvent. A bibliographical review of the fundamentals of fluorescence, the parameters involved, and the characteristics of the fluorophore used was done. The spatial distribution of the intensity near focus for a low N.A. microscope objective illuminated with a truncated Gaussian beam was calculated using the approach of Horvath and Bor (2003). Then, a fluorescence microscopy system with two possible geometries (epifluorescence and 4pi geometry) was designed and constructed. It allowed for the effects of parameters related to the sample, such as concentration and thickness, to be investigated. It also permitted study of the effects of system parameters, such as the wavelength of excitation, focusing position of the microscope objective, use of continuous or pulsed excitation, and geometry of the collection system. Among the results obtained, the use of the 4pi geometry and careful selection of the studied parameters allowed for observable signals with excitation power incident on the sample as little as 0.5nW. Information for intensity saturation was extracted from the pulsed excitation source data, which allowed for determination of the absorption cross-section of the fluorophore. | |
| CICESE | |
| 2015 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Juárez Alvarez, B.A.2015.Studies of fluorophores in a fluorescence microscopy system..Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.65 pp. | |
| ÓPTICA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Óptica |
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