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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/620| Purificación y evaluación citotóxica de un anticuerpo tipo vNAR neutralizante de TGF-beta, aislado del tiburón Heterodontus francisci Purification and cytotoxic evaluation of a vNAR type antibody that neutrilaze TGF-β, isolated from Heterodontus francisci shark | |
| Constanza Estefania Martínez Olivares | |
| ALEXEI FEDOROVISH LICEA NAVARRO | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Tiburón,anticuerpo vNAR | |
| En este trabajo se clonó y expresó en Pichia pastoris un anticuerpo vNAR neutralizante de la citocina TGF-β, obtenido de una biblioteca no inmune a partir del tiburón Heterodontus francisci. Se ha demostrado que los anticuerpos de dominio sencillo (vNAR) gracias a su pequeño tamaño tienen una profunda penetración en tejidos densos y son rápidamente eliminados del organismo. Estas características los convierten en potenciales agentes terapéuticos y de diagnóstico; sin embargo, la pureza de la proteína es un factor fundamental para su utilización. En el presente trabajo, se logró establecer una condición óptima de purificación para el anticuerpo vNAR anti-TGF-β, mediante el sistema níquel-ácido nitriloacético (Ni-NTA). Se demostró que el anticuerpo mantuvo su actividad, ya que fue capaz de reconocer a la isoforma TGF-β2, y se demostró el reconocimiento de la citocina TGF-β en lágrimas humanas mediante un ensayo colorimétrico. Se realizó un ensayo de citotoxicidad en cultivo primario de hepatocitos de ratón, donde se demostró que el anticuerpo no afecta la supervivencia de estas células al ser empleado a una concentración de 1.5 æg/mL, lo que podría indicar que este anticuerpo no daña a las células de este órgano. Debido a que la desregulación de TGF-β tiene un efecto inmunosupresor en distintas enfermedades infecciosas, este anticuerpo podría ser considerado como un potencial agente terapéutico. In this work we have cloned and expressed in Pichia pastoris one vNAR-neutralizing antibody of TGF-β cytokine, obtained from a non-immune library from a Heterodontus francisci shark. It has been shown that single domain antibodies (vNAR) thanks to its small size, have deep penetration into dense tissues and rapid clearance from the body. These characteristics make them potential therapeutic and diagnostic agents, nevertheless, purity of the protein is a key factor. In this work, we were able to establish the optimum condition for purification of the vNAR anti-TGF-β antibody by the nickel-nitrilotriacetic acid (Ni- NTA) system. It was shown that the antibody maintained its activity, as it was able to recognize the isoform TGF-β2, and recognition of the cytokine TGF-β in human tears, as demonstrated by a colorimetric assay. A cytotoxicity assay was performed on primary cultures of mouse hepatocytes, which showed that the antibody does not affect the survival of these cells, at a concentration of 1.5 æg/mL, which could indicate that this antibody does not harm this organ cells. Since deregulation of TGF-β has an immunosuppressive effect on various infectious diseases, the antibody may be considered as a potential therapeutic agent. | |
| CICESE | |
| 2014 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Martínez Olivares, C.E.2014.Purificación y evaluación citotóxica de un anticuerpo tipo vNAR neutralizante de TGF-beta, aislado del tiburón Heterodontus francisci.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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