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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/626| El papel de la proteína RGD-1 en el crecimiento polarizado del hongo filamentoso Neurospora crassa The role of the RGD-1 protein in the polarized growth of the filamentous fungus Neurospora crassa | |
| Marisol González Amarillas | |
| Ernestina Castro Longoria | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Hongo filamentoso,Neurospora crassa,Crecimiento polarizado,Células eucariotas,Microbiología,Proteína RGD-1,RhoGAPs,GTPasa,Filamentous fungus,Polarized growth,Eukaryotic cells,Microbiology,RGD-1 Protein | |
| Las proteínas Rho son esenciales como reguladores del crecimiento polarizado en las células eucariotas. Estas proteínas son reguladas por las proteínas activadoras de GTPasas (RhoGAPs). En N. crassa se ha descrito a LRG-1 como una reguladora de la RHO-1, sin embargo no existen estudios que identifiquen el resto de las RhoGAPs de este hongo filamentoso. En este trabajo se identificó a gen rgd-1 en N. crassa (NCU00553.5) el cual codifica para la proteína RGD-1, de 743 aminoácidos, que contiene el dominio F-BAR en el N-terminal y un dominio RhoGAP en el C-terminal característico de las proteínas RhoGAPs. Se llevó a cabo el estudio del papel de la proteína RGD-1 a través de la caracterización fenotípica de la cepa mutante Δrgd-1. Se encontró que la ausencia de esta proteína genera hifas con mayor número de ramificaciones y una disminución en la producción de conidios. También se caracterizó el fenotipo de una cepa doble mutante Δrgd-1;Δbem-3, la cual mostró un patrón de ramificación similar al de la cepa Δrgd-1. Respecto a la tasa de crecimiento todas las cepas mutantes analizadas se observaron muy semejantes a la cepa silvestre. El sitio específico de activación de la Rho GTPasa CDC-42 es crítico para el establecimiento de la polaridad celular, por ello se analizó la localización de la la Rho GTPasa CDC-42 etiquetada con YFP en la cepa mutante Δrgd-1, revelando una localización el ápice de las hifas, similar que una cepa silvestre. Sin embargo el área apical que ocupa CDC-42 en la cepa mutante de Δrgd-1 se ve ligeramente disminuída. Por lo cual, se analizó la localización de la actina a través del reportero lifeact-GFP en la cepa mutante de Δrgd-1. La localización de la actina no se vio afectada, observándose igual que una cepa silvestre en los sitios del collar endocítico y en el spitzenkörper. Por los resultados obtenidos se puede concluir que RGD-1 participa en la regularización de la Rho GTPasa CDC-42, sin embargo no es esencial y en su ausencia CDC-42 es regulada por otras GAPs. Rho proteins are essential regulators of polarized growth in eukaryotic cells. These proteins are regulated in vivo by Rho GTPase activating proteins (RhoGAPs). In N. crassa LRG-1 has been described as a regulator of the RHO-1, however there are no studies that identify the remaining RhoGAPs in this filamentous fungus. In this work the gene rgd-1 was identified the N. crassa (NCU00553.5) which encodes the RGD-1 protein of 743 amino acids containing the F-BAR domain at the N-terminus and a characteristic RhoGAP domain of the GAP proteins at the C-terminus. The study of the role of RGD-1 protein was done by phenotypic characterization of the mutant strain Δrgd-1. It was found that the absence of this protein generates hyphae with more branches and a decrease in the conidia production. Also, a double mutant for two GAPs was phenotypically characterized, the double mutant strain Δrgd-1;Δbem-3, which showed similar branching pattern as the rgd-1 strain the branching pattern of the strain Δrgd-1. Regarding the growth rate of all strains it was observed a very similar pattern to the wild type strain. Site specific activation of the Rho-type GTPase CDC-42 tagged with YFP in a Δrgd-1 mutant strain was analyzed, revealing a location at the apex of the cell, as in the wild type strain. However, the area occupied by CDC-42 was slightly less in the mutant rgd-1. Therefore, actin localization through lifeact-GFP reporter in Δrgd-1 mutant strain was analyzed. The localization of actin was not affected, it was observed in endocytic sites and in the spitezkörper. From the results obtained it can be concluded that RGD-1 participate in the RhoGTPase CDC-42 regulation, however is not essential and its absence on other GAPs regulate CDC-42. | |
| CICESE | |
| 2014 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| González Amarillas, M.2014.El papel de la proteína RGD-1 en el crecimiento polarizado del hongo filamentoso Neurospora crassa.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. | |
| HONGOS | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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