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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/638| Localización y dinámica de las proteínas: miosinas de clase II (MYO-2) miosina de clase V (MYO-5), miosina de cadena ligera (CDC-4) y coronina (CRN-1) en el hongo filamentoso Neurospora crassa Localization and dynamics of the proteins : | |
| Ramón Osvaldo Echauri Espinosa | |
| Rosa Reyna Mouriño Pérez | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Fungi,Actin,Myosins,Fungal cells,Proteins,Neurospora crassa,Actina,Células fúngicas,Miosinas,Coronina,Proteínas | |
| El citoesqueleto de actina es un elemento clave en el crecimiento polarizado en las células fúngicas. Este citoesqueleto es altamente dinámico, regulado por una gran diversidad de proteínas denominadas ABPs (Proteínas de unión a actina), entre las cuales se encuentran las miosinas y la coronina. Las miosinas son proteínas motoras encargadas de generar fuerza motriz dentro de la célula. Por otro lado, la coronina regula la tasa de recambio entre actina filamentosa y monomérica a través de la regulación de un nucleador de actina llamado Arp2/3. MYO-5-GFP, MYO-2-GFP y CDC-4-GFP se localizaron en el Spk. MYO-5-GFP ocupó una mayor porción del Spk que aquella teñida por el colorante FM4-64. MYO-2-GFP se localizó sólo en la región central del Spk y CDC-4 colocalizó con el Spk en su totalidad al mismo tiempo que se encontró en el domo apical en forma de media luna. El efecto de citocalasina A y benomilo en la localización de estas proteínas reveló que son dependientes de actina y no de microtúbulos. Durante la formación de septos, MYO-2 y CDC-4 se encontraron en forma de filamentos los cuales viajan desde las regiones basales hasta el sitio donde se dará la formación del anillo contractril de actomiosina (CAR) y permanecieron allí hasta la formación del septo. Por su parte, MYO-5 no se encontró en forma de filamentos más si se localizó en el septo. Por otro lado la coronina-GFP se localizó en forma de parches, formando un anillo subapical. Estos parches subapicales de coronina co-localizaron con la fimbrina, con el complejo Arp2/3 y con actina. La deleción de crn-1 afectó la velocidad de crecimiento y la morfología hifal. La dinámica y localización de actina se vio afectada así como la internalización del colorante FM4-64 se vio retrasada en comparación con una cepa silvestre, lo que indica una alteración del proceso endocítico. El análisis de la dinámica de las Rho-GTPasas CDC-42 y RAC etiquetadas con YFP en la mutante Δcrn-1 reveló que estos marcadores de polaridad y secreción normalmente localizados adelante del anillo endocítico subapical, se desplazan llegando a observarse posteriores a este. La coronina al parecer mantiene en equilibrio al aparato endocítico en la zona subapical, permitiendo una delimitación clara entre las zonas apical (exocítica) y subapical (endocítica) y un crecimiento apical constante. The actin cytoskeleton is a key element in polarized growth. Actin is a highly dynamic component regulated by a great diversity of proteins called ABPs (Actin Binding Proteins), which include myosin and coronin. Myosin are motor proteins that generate motive power within the cell. Coronin proteins regulate actin turnover through regulation of the Arp2/3 complex. MYO-5-GFP, MYO-2-GFP and CDC-4-GFP were localized in the hyphal apex co-localizing with the Spk. MYO-5-GFP cover a wider area than that of the Spk labeled with FM4-64. MYO-2-GFP had a more restricted localization, at the center of the Spk. CDC-4 colocalized with the entire Spk and also was found at the apical dome in the form of a crecent. Cytochalasin A and benomyl treatments showed that myosins require the actin but not the microtubular cytoskeleton to reach the tip. Before septum formation, MYO-2-GFP and CDC-4-GFP were found forming filaments prior to the construction of the actomyosin ring. Both proteins move from previous sites of septation to new septation places. MYO-5-GFP was observed only after the actomyosin ring was formed and all myosins remained at the septum until its synthesis was completed. CRN-1-GFP was localized in patches, forming a subapical collar near the hyphal apex; significantly, it was absent from the apex. The subapical patches of coronin co-localized with fimbrin, Arp2/3 complex, and actin, altogether they comprise the endocytic collar. Deletion of crn-1 resulted in reduced hyphal growth rates, distorted hyphal morphology and uneven wall thickness; it also affected growth directionality and increased branching. The Spk of Δcrn-1 mutant was unstable giving rise to periods of polar and isotropic growth. Uptake delay of FM4-64 in the Δcrn-1 mutant indicated a partial disruption in endocytosis. Observation of the dynamics of the so-called polarity markers CDC-42 and RAC labeled with YFP, normally located in front of the subapical ring, changed their location to areas posterior to this ring. These observations underscore coronin as an important component of F-actin remodeling in N. crassa. Although coronin is not essential in this fungus, its deletion influenced negatively the operation of the actin cytoskeleton involved in the orderly deployment of the apical growth apparatus, thus preventing normal hyphal growth and morphogenesis. | |
| CICESE | |
| 2013 | |
| Tesis de doctorado | |
| Español | |
| Echauri Espinosa, R.O.2013.Localización y dinámica de las proteínas: miosinas de clase II (MYO-2) miosina de clase V (MYO-5), miosina de cadena ligera (CDC-4) y coronina (CRN-1) en el hongo filamentoso Neurospora crassa.Tesis de Doctorado en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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