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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/662| Análisis funcional de la miosina de clase II en la organización apical en el hongo filamentoso Neurospora crassa Functional analysis of a class II myosin in the apical organization of the fungus Neurospora crassa | |
| Fernando Alonso Núñez Moreno | |
| Rosa Reyna Mouriño Pérez | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Microbiología | |
| El hongo filamentoso Neurospora crassa es un modelo de estudio con crecimiento polarizado como resultado de la distribución controlada de vesículas secretoras a la punta en crecimiento. Uno de los componentes más importantes para el crecimiento polarizado es el citoesqueleto de actina y sus proteínas asociadas a actina (ABPs), incluyendo los motores moleculares de la familia de las miosinas. Las miosinas de clase II son proteínas capaces de utilizar la energía química del ATP y formar filamentos bipolares para generar movimiento y fuerza. En el presente trabajo se estudió a la MYO-2, una miosina de clase II de N. crassa y su papel en la morfogénesis y el crecimiento polarizado utilizando una cepa que expresa la MYO-2 fusionada a la proteína verde fluorescente (GFP) y una mutante por deleción (Δmyo-2). La MYO-2-GFP se localizó en el septo, macroconidios y en la punta de la hifa, co-localizando con el Spitzenkörper. La MYO-2-GFP co-localiza con el Spk teñido con FM4-64. El análisis FRAP muestra una recuperación de la fluorescencia del 50% a los 51 segundos y una recuperación total a los 2:10 minutos. Los ensayos con blebistatina muestran que la localización de la MYO-2 es dependiente de su actividad ATPasa ubicada en el dominio motor y la deslocalización provoca cambios en la morfología de la hifa. La cepa mutante Δmyo-2, mostró anormalidades en vacuolas, una reducción de 77% en la tasa de crecimiento, una reducción de la formación de micelio aéreo en un 95%, una reducción del 57% en el diámetro de las hifas, una reducción del 45% en su biomasa y una reducción del 54% en el número de ramificaciones. La septación y conidiación están severamente afectadas, así como la capacidad de controlar daños ante lesiones mecánicas. Las observaciones de la punta de la cepa mutante Δmyo2 muestra que el Spk se encuentra morfológicamente normal en ausencia de la MYO-2, sin embargo, se observa un aumento en los cambios del eje de crecimiento en la cepa mutante Δmyo-2. Los resultados de este trabajo indican que la MYO-2 es fundamental para la formación del septo, liberación de macroconidios y micelio aéreo, se encuentra asociado estructuralmente con Spk y participa en el direccionamiento del crecimiento. The filamentous fungus Neurospora crassa is a model of study that has polarized growth as a result of the controlled release of exocitic vesicles to the tip. One of the most important component for polarize growth is the actin cytoskeleton and the actin binding proteins (ABP), including motor molecules like the family of myosins. The type II myosins are proteins capable of using the chemical energy of ATP and assemble in bipolar filaments to generate movement and force. In the present work MYO-2 a type II myosin was studied in N. crassa, we explored the role of this protein in morphogenesis and polarized growth by using a strain that expresses MYO-2 fused to a green fluorescent protein (GFP) and a deletion mutant of myo-2 (Δmyo-2). The MYO-2-GFP was localized to the tip of the hypha, in the septum and in microconidia. The MYO-2-GFP in the tip co-localizes with the Spk stained with FM4-64. The FRAP analysis shows a recovery of 50% of the fluorescence after 51 seconds and a total recovery after 2:10 minutes. The assays with blebistatin show that the localization of MYO-2 is dependent on its ATPase activity, localized in the motor domain. The mutant strain Δmyo-2, showed vacuole abnormalities, a reduction in growth rate of 77%, a reduction in aerial mycelium formation of 95%, a reduction in diameter of the hypha of 57%, biomass reduction of 45% and the number of ramifications in 54%. Septation and conidiation are severely affected as well as the capacity to control damage after mechanical injury. The analysis of the tip in mutant strain Δmyo-2 showed that the Spk is morphologically normal in the absence of MYO-2, however, it’s been observed an increase in the change of the growth axis in the mutant strains Δmyo-2. The results of this work suggest that the MYO-2 is fundamental for the formation of septa, liberation of macroconidia and the formation of aerial mycelium, it is structurally associated to the Spk and is involved in the directioning of growth. | |
| CICESE | |
| 2016 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Núñez Moreno, F.A.2016.Análisis funcional de la miosina de clase II en la organización apical en el hongo filamentoso Neurospora crassa.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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