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http://cicese.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1007/973| Identificación de Cuerpos Multivesiculares en Neurospora crassa Identification of Multivesicular Bodies in Neurospora crassa | |
| ALBA ANAYATZIN AGUILAR ROMERO | |
| MERITXELL RIQUELME PEREZ | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución | |
| Biología celular y molecular | |
| El transporte vesicular dirigido a vacuola puede ocurrir mediante la ruta biosintética o la ruta endocítica. En ambos casos, la ubiquitinación de proteínas actúa como una señal para la formación de cuerpos multivesiculares (MVBs). Éstos se forman cuando la membrana del endosoma tardío invagina dentro de su propio lumen, formando vesículas intraluminales (ILVs), cuyo contenido es degradado, cuando los MVBs se fusionan con vacuola, o liberadas al espacio extracelular como exosomas, cuando los MVBs se fusionan con la Membrana Plasmática (MP). La formación de las ILVs requiere la participación de los complejos multiproteícos ESCRT-0, I, II y III (Endosomal Sorting Complex Required for Transport). Este trabajo ha caracterizado morfológicamente a los MVBs en el hongo filamentoso Neurospora crassa, y estudiado su papel en la biogénesis o reciclaje de enzimas dirigidas hacia la MP. Como marcadores de MVB se analizaron VPS-27 y VPS-2, proteínas que conforman ESCRT-0 y ESCRT- III, respectivamente, y presuntamente tienen un papel importante en la formación de MVBs. Se localizándo a lo largo de la hifa excluyendo el ápice en estructuras puntiformes. Sin embargo, VPS-27 está en la membrana de cuerpos pleomórficos mayormente esféricos, mientras que VPS-2 se encuentra en el lumen de cuerpos globulares más uniformes y distintos a los identificados por VPS-27, así como en la membrana de aquellos cuerpos marcados por VPS-27.Como marcador de proteínas de membrana, se utilizó quitina sintasa 1 (CHS-1) la cual co-localiza parcialmente en forma punteada con los cuerpos marcados por VPS-2-GFP, sugieriendo que los quitosomas pueden ser originados en los MVBs como lo sugieren estudios previos. Para conocer la naturaleza de los cuerpos elucidados por VPS-2-GFP y VPS-27-GFP se usaron cepas que expresaban marcadores de otros organelos, como el marcador vacuolar VMA-1 y el marcador endosomal RAB-7, las cuales co-localizan parcialmente en la membrana de los compartimentos prevacuolares (PVC). Se encontró la presencia tanto de RAB-7, como de VMA-1 en la membrana de los cuerpos marcados por VPS-27-GFP, así como en el centro de los cuerpos marcados por VPS-2-GFP, sugiriendo que los PVCs y los MVBs pueden converger y tratarse de un mismo organelo. La co-expresión de VPS-27-GFP y VPS-2-mCherry mostró la presencia de VPS-2 en la membrana de los cuerpos marcados por VPS-27-GFP.
Vesicular transport to vacuole can occur through the biosynthetic or endocytic pathways. In both cases, the ubiquitination of the proteins acts as a signal for the formation of Multivesicular Bodies (MVBs), which are formed when the late endosome membrane invaginates within their own lumen forming intraluminal vesicles (ILVs). The content of the ILVs may be degraded, when the MVBs fuses with vacuoles, or released into the extracellular space as exosomes, when the MVBs fuse to the plasma membrane (MP). The formation of ILVs requires the participation of the multiprotein complexes ESCRT-0, I, II and III (Endosomal Sorting Complex Required for Transport). This work has studied the distribution of MVBs in the filamentous fungus Neurospora crassa, and their role in the biogenesis or recycling of enzymes directed to the MP. VPS-27 and VPS-2, constituents of ESCRT-0 and ESCRT-III, respectively, with presumably an important role in the formation of MVBs were used as MVB markers. They were found in a similar distribution, localizing as punctiform structures along the hyphae, excluding the apex. VPS-27 was also found in the membrane of mostly spherical pleomorphic bodies. VPS-2 was present in the lumen of globular bodies, as well as in the membrane of those bodies marked by VPS-27-GFP. Chitin synthase 1 (CHS-1) was used as a membrane protein marker, and it partially co-localized with bodies marked by VPS-2-GFP, suggesting that chitosomes could derive from MVBs as indicated by previous reports. In order to know the nature of the bodies elucidated by VPS-2-GFP and VPS-27-GFP, a set of different strains expressing markers for other organelles, such as the vacuolar marker VMA-1 and the late endosomal marker RAB-7, both proteins that co-localize at the prevacuolar (PVC) membrane, were used. Co-expression of these proteins with VPS-27-GFP identified both VMA-1 and RAB-7 at the membrane of the bodies marked by VPS-27-GFP, as well as in the center of the bodies marked by VPS-2-GFP, suggesting that PVCs and MVBs can converge or mature and become the same organelle. Co-expression of VPS-27-FGP and VPS-2-mChFP showed the presence of VPS-2 at the membrane of the bodies marked by VPS-27. | |
| CICESE | |
| 2017 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Aguilar Romero, A A. 2017. Identificación de Cuerpos Multivesiculares en Neurospora crassa. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. 60 pp. | |
| MICROBIOLOGÍA | |
| Aparece en las colecciones: | Tesis - Ciencias de la Vida |
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